《表1 基因多态性位点引物设计》

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《Nrf2基因多态性与高原地区藏族人群POAG易感性的关系》

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根据Gen bank公布的序列，利用Primer 5.0生物软件设计各Nrf2基因多态性位点的引物，进行PCR反应，PCR反应体系:高保真Taq酶1μl，上、下游引物（25μmol/L）各1μl，10×Tap Buffer 1μl，4×dNTP（2.5mmol/L）1μl，DNA模板1μl，ddH2O 14μl，单管反应体积20μl。PCR反应条件:先94℃预变性5min，然后94℃变性、30 s，60℃退火45 s、72℃延伸45 s，以上3个步骤循环35次，最后72℃延伸10min。反应结束后取出离心备用，对产物进行纯化。采用限制性内切酶MspⅠ（大连宝生物工程公司）酶切鉴定。酶切反应体系:10×Buffer 1.5μl，0.1×BSA 1.5μl，MspⅠ0.8μl，PCR产物DNA 6μl，ddH2O 5.2μl。单管反应体积15μl。反应条件:37℃下温浴2 h，10×Buffer 1.5μl终止反应。酶切产物以3.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色分析。产物委托北京天根生化科技有限公司代为测序，引物序列见表1。