《表1 引物设计：云南省婴儿期不同民族高非结合性胆红素血症UGT1A1基因多态性研究》

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《云南省婴儿期不同民族高非结合性胆红素血症UGT1A1基因多态性研究》

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抽取受试者静脉血2 mL，采用外周血样本DNA提取，采用PCR方法获取UGT1A1基因，针对exon1、exon2、exon3、exon4、exon5五个目的基因区段进行PCR扩增和DNA直接测序，确定基因突变和变异；分析氨基酸的改变。（1）样本DNA提取：严格按血液基因组DNA抽提试剂盒操作提取基因组DNA；（2）引物的设计，见表1；（3）PCR扩增体系：扩增反应总体积为20μL，6×Buffer缓冲液5μL，Taq酶（5 U/L)1μL，dNTP 5μL，引物各2μL，模板5μL，加无菌去离子水至25μL；反应条件94℃30 s，58℃30 s，72℃40 s，循环35次；72℃10 min；（4）PCR产物纯化后在用AB-3500型测序仪进行直接测序；（5）测序图采用BioEdit基因阅读软件读图并人工核对，和基因库中的标准序列NG＿009254.1和已报道的SNP位点进行比对，初步判定变异位点，对变异所在的序列重复PCR并反向测序加以证实；（6）测序结果用Chromos基因阅读软件判断，用Mutation Surveyor4.0软件分析突变位点，用HGMD数据库查询。