《表1 HSP90AA1基因5个多态性位点引物设计》

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《精子DNA碎片与HSP90AA1基因多态性的相关性研究》

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通过公共数据库选择HSP90AA1基因多态性位点，最终rs10133307、rs10873531、rs11547523、rs11621560和rs7145597纳入本研究。采用Tiangen?Tianamp血液DNA试剂盒提取外周血DNA。基因分析采用Sequenom Massarray平台（Sequenom iPLEX assay，San Diego，CA，USA）。根据HSP90AA1的cDNA序列设计了5对引物（表1）。按如下条件进行PCR扩增:反应体系包括10 ng DNA，0.5μl 10×PCR缓冲液，0.4μl 25 mmol/L MgCl2，0.1μl 25 mmol/L dNTPs，1μl 0.5μmol/L primer Mix和0.2μl 5 U/μl Hot Star Taq polymerase。扩增条件如下:反应在94°C下进行15 min，随后在94°C下进行45个循环，持续20 s，56°C持续30 s，72°C持续1 min，最终在72°C下培养3 min。延伸反应在94°C下进行30 s，然后在94°C持续5 s，随后在52°C持续5 s，5个循环，80°C持续5 s，最终在72°C下孵育5 s。利用4.0版的Massarray Typer软件对基因分型结果进行了分析。所有多态性位点分型的call rates>94%。