《表2 EV71单抗工具箱单抗库基本信息》

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《2018年肠道病毒71型灭活疫苗国家监督抽验质量分析及评价》

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选择交叉反应性良好，中和效价较高，中和表位清晰的6个EV71单抗作为单抗工具箱（见表2），由中国食品药品检定研究院（National Institutes for Food and Drug Control，NIFDC）建立ELISA法评价疫苗单抗反应一致性。将EV71兔多抗包被96孔板，包被液为碳酸盐缓冲液（pH 9.6)，100μL/孔，2～8℃过夜；洗涤3次，每孔加入150μL封闭液（PBS+2%BSA)，37℃封闭2 h；洗涤3次，将抽验样品用解离液解离后，稀释20、40、80及160倍，100μL/孔，37℃孵育1 h；洗涤3次，采用酶结合物稀释液（PBS+2%BSA）将6种单抗稀释至10μg/mL，100μL/孔，37℃孵育1 h；洗涤3次，加入羊抗鼠IgG(1∶40 000稀释），100μL/孔，37℃孵育1 h；洗涤3次，每孔加入TMB显色液100μL，37℃下避光显色10 min；加入50μL终止液。用酶标仪检测，读取A450/A630。按下式计算单抗反应率，取平均值。