《表3 unclassified Aspergillus OTUs在NCBI BLAST网页上的菌种鉴定结果》

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《陕西茯砖茶的微生物多样性和群落结构》

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经过“unite7.0/its＿fungi”数据库注释，从Aspergillus属的序列中仅鉴定出3个种：Aspergillus cibarius、Aspergillus piperis、Aspergillus penicillioides，平均相对丰度分别为4.138%、0.879%、0.019%，其余相对丰度94.591%的序列未能得到种水平信息。unclassified＿g＿Aspergillus的序列共有7条，其OTU编号为38、135、59、71、118、45、77，将它们输入GenBank数据库（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）比对，得到的种类鉴定结果如表3所示。OTU118的Query Coverage只有85%，即与数据库中序列重合度只有85%，其余15%的序列无参考序列与之比对，尽管序列相似度（Percent Identity）达到100%，其菌种鉴定结果有可能不可靠。与序列OTU38、135、59、71匹配度最高的参考序列都为曲霉属的序列，同源性大于99%，但是存在多个菌种，即可能为阿姆斯特丹曲霉Aspergillus amstelodami、谢瓦氏曲霉Aspergillus chevalieri、Eurotiumsp．、Aspergillus spiculosus、Aspergillus heterocaryoticus、Aspergillussp．、Aspergillus ruber、Aspergillus cristatus中的一种或几种，由于ITS1序列同源性比较高而不容易区分。根据真菌ITS序列鉴定的原则，如果所提交序列与数据库中最匹配序列为同属内不同种之间的序列，并且序列的同源性均≥98%时，认为其可鉴定至属一级[24]，即可认为序列OTU38、135、59、71鉴定至属Aspergillus。类似地OTU77也可能为Aspergillus versicolor、Aspergillus creber、Aspergillus protuberus中的一种或几种。用MEGA(v7.0.14）软件对这6条序列和GenBank中相应的参考序列一起采用Neighbor Joining法构建系统进化树（图4），待测序列与参考序列的聚类关系与GenBank数据库的比对结果一致。综合上述结果可知：陕西茯砖茶中最优势的菌种可能为阿姆斯特丹曲霉Aspergillus amstelodami、谢瓦氏曲霉Aspergillus chevalieri、Eurotiumsp．、Aspergillus spiculosus、Aspergillus heterocaryoticus、Aspergillussp．、Aspergillus ruber、Aspergillus cristatus中的一种或几种，其次还含有Aspergillus cibarius(4.138%）、Aspergillus piperis(0.879%）、Aspergillus penicillioides(0.019%）、Aspergillus gracilis(0.005 8%）等曲霉属的菌种。