《表1 En1、Otx2、Fgf8、Foxg1和Gbx2基因引物》

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《Cep164基因缺失对小鼠胚胎早期脑发育的影响》

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参照Graser等[1]的方法合成En1、Otx2、Fgf8、Foxg1和Gbx2基因探针。采用5组引物（表1），选用巢式PCR分别扩增目标基因，纯化PCR产物经BamHⅠ和Eco RⅠ双酶切，连接PBS-SK质粒，转化大肠杆菌感受态细胞挑取单克隆，获得的重组质粒经测序确认序列无误及判断插入方向后，采用BamHⅠ将Bs-En1、Bs-Otx2、Bs-Fgf8和Bs-Foxg1重组质粒线性化，Eco RⅠ将Bs-Gbx2重组质粒线性化。如图1所示，以线性化片段为模版用T3或T7 RNA聚合酶体外转录合成带地高辛（DIG）标记的En1、Otx2、Fgf8、Foxg1和Gbx2基因探针。分别取1μL反应物，用葡聚糖凝胶电泳进行探针检测。