《表2 不同ISSR引物序列及ISSR扩增情况》

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《基于ISSR标记的西南地区石斛资源亲缘关系分析》

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参考ISSR反应体系[17-18]稍加改进：PCR反应体积20μL，包含稀释过的DNA模板2.0μL，MIX 8.0μL引物（10μmol/L)1.0μL，无菌去离子水9μL。PCR扩增程序参考孔琼等[17-18]并加以改进，具体：94℃预变性5min；94℃变性1min，退火45s（退火温度由引物而定，具体见表2)72℃延伸2min，共45个循环，72℃复性7min，4℃保存PCR产物。扩增产物用1.5%的琼脂糖凝胶在1×TAE缓冲液中电泳检测。使用Super DNA marker标定扩增片段长度，在90V电压下，电泳1.5h后置于凝胶成像系统上观察、照相，检测ISSR-PCR谱带。考虑条带清晰度，因而采用17孔电泳槽梳子加大扩增产物剂量，因此下面扩增电泳图谱仅部分呈现。