《表3 ISSR引物序列及其对真藓样品的扩增结果》

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《沿海岛屿与内陆藓类植物遗传多样性和分化的比较研究——以真藓(Bryum argenteum Hedw.)为例》

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采用PCR正交实验设计方法，对影响ISSR-PCR实验的模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+和Taq DNA聚合酶5个因素在4个水平上进行优化，优化的20μL ISSR-PCR反应体系包括:20 ng DNA模板，0.45μmol/L引物，2.65 mmol/L Mg2+，0.4 U Taq DNA聚合酶，0.45 mmol/L dNTPs。扩增反应程序为:94℃预变性4 min；94℃变性1 min，退火2 min，72℃延伸1 min，40个循环；最后72℃延伸7 min；4℃保存。PCR扩增产物用含有EB核酸染料的2%琼脂糖凝胶电泳分离（电压100 V，60 min），用全自动数码凝胶成像分析系统（Tanon 2500）进行观察和拍照。对哥伦比亚大学公布的100条引物（上海生工生物工程技术服务有限公司提供）进行筛选，选取扩增条带稳定、清晰、重复性好的20个引物对全部样品进行扩增（表3）。