《表1 基因及序列:晚期胃癌组织中LncRNA HOTAIR、BRCA-1的表达及药敏相关性》

《表1 基因及序列:晚期胃癌组织中LncRNA HOTAIR、BRCA-1的表达及药敏相关性》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《晚期胃癌组织中LncRNA HOTAIR、BRCA-1的表达及药敏相关性》


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取-80℃冻存的病灶组织研磨成粉,加入TRIzol1 ml,静置300 s,60℃350 r·min-1涡旋振荡16 h,加入10μl蛋白酶K,60℃350 r·min-1涡旋振荡12 min,加入体积比5∶1的酚氯仿,混匀,离心,取上清,加入300μl异丙醇、20μl醋酸钠和2.5μl糖原混匀,离心,弃上清,加入150μl 75%乙醇混匀,离心,弃上清,加DNA酶抑制剂提取总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),使用分光光度计测定RNA吸收值(OD260 nm/OD280 nm=1.9~2.0),计算RNA浓度。依照逆转录试剂盒说明书进行操作逆转互补脱氧核糖核酸(complementary Deoxyribonucleic acid,cDNA),-80℃保存备用。依照SYBR Green说明书进行操作配制实时荧光定量PCR反应体系,每个样本重复测量3次,溶解曲线检测,测定病灶组织中LncRNA HOTAIR、BRCA-1及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)水平,以LncRNA HOTAIR/GAPDH及BRCA-1/GAPDH值表示两指标表达水平。所用引物均由南京金斯瑞生物科技有限公司设计并合成。若LncRNA HOTAIR/GAPDH≥1.5则判定LncRNA HOTAIR高表达,BRCA-1/GAPDH≥1.3则判定BRCA-1高表达。各基因及序列详见表1。