《表1 引物序列:大鼠胃黏膜组织Syk、Survivin蛋白、P53及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性》

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《大鼠胃黏膜组织Syk、Survivin蛋白、P53及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性》


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取各组胃黏膜组织35 mg,利用TRizol法提取总RNA,检测浓度并取10μl的总RNA,根据c DNA Kit试剂盒进行逆转录。采用荧光实时定量PCR(quantitative realtime PCR,Q-PCR)检测P53和AMP-18 mRNA的水平;反应体系总体积10μl:c DNA模板(50 ng/μl) 1μl,正反向引物(10μmol/l)各0.5μl。扩增条件:95℃预变性3 min,95℃变性5 s,60℃退火34 s,扩增循环40次;最后一个循环95℃15 s,60℃1 min,95℃延伸15 s。每个样品设置3个重复,并以GAPDH作为内参测定P53和AMP-18 mRNA水平;定量PCR特异产物通过溶解曲线分析,以2-ΔΔCT表示相对基因表达变化。PCR引物序列见表1(北京鼎国昌盛生物技术公司)。