《表1 qRT-qPCR引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《干扰FADS2基因对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸组成的影响》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

根据上海吉玛公司合成的siRNA说明书，将离心管中粉末状的si-FADS2及si-NC用RNase Free的ddH2O溶解为20μmol/L储存液置于-20℃冰箱保存。培养奶山羊原代乳腺上皮细胞，其中细胞基础培养基由90%DMEM/F12，10%胎牛血清，抗生素（10 kU/L青/链霉素）及多种细胞因子（5μg/mL牛胰岛素，10 ng/mL表皮生长因子，5 mg/L氢化可的松）组成。待细胞密度达到70%～80%时，参照Invitrogen公司的Lipofectamine?RNAiMAX说明书，配置终浓度为100μmol/L转染复合物，静置20 min，将复合物添加于细胞中。转染12 h观察细胞形态并拍照；转染24 h换液，处理48 h后去除培养基，用PBS洗3次，加500μL TRIZOL用于RNA提取，检测RNA浓度；参照TAKARA反转录试剂说明书将RNA反转录为c DNA，进行实时荧光定量PCR分析。反应体系和反应条件均参考朱江江（2011）的方法，每个处理设置3个重复，每个样品重复3次。选择广泛表达转录蛋白基因（ubiquitously expressed transcription，UXT）和核糖体蛋白S9基因（ribosomal protein S9，RPS9）为内参基因，采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析。qRT-PCR引物序列见表1。