《表1 按蚊胃血多重PCR引物序列》

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《云南省边境地区景洪市疟疾媒介调查》

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利用GENEray GK1402血液基因组DNA提取试剂盒提取诱捕的按蚊胃血DNA。利用宿主特异性线粒体细胞色素b基因设计多重PCR 6种引物序列，包括包括1种通用引物、5种特异性引物（人、牛、猪、羊、犬）（表1）[4-8]。引物由美国Invitrogen公司合成。多重PCR反应体系（25μl）:2×PCR预混液12.5μl，5种引物（10μmol/L）各0.6μl，通用上游引物（Unfor）和通用下游引物（Unrevl025）各0.6μl，ddH2O 6.3μl，DNA2.0μl。反应条件为:95℃5 min；94℃30 s，58℃30 s，72℃1 min，共循环35次；72℃5 min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，120 V电泳40 min，紫外凝胶成像仪下拍照保存。