《表1 6种毒素基因的扩增引物序列》

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《一起疑似产气荚膜梭菌食物中毒事件的病原学分析》


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PCR扩增α、β、ε、ι、CPE和β2 6种毒素基因(cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2),引物序列见表1[8],这6对特异性引物由上海生工生物工程公司合成。使用细菌DNA提取试剂盒提取5株产气荚膜梭菌的DNA作为模板。PCR扩增体系(50μL);2×PCR Mastermix 25μL,上下游引物各2μL,DNA模板10μL,用无菌去离子水补足至50μL。PCR反应参数为;预变性94℃,5 min;变性94℃,1 min;退火55℃,1 min;延长72℃,1 min;35个循环,再延长72℃,10 min。取扩增产物5μL在1.0%琼脂糖凝胶上电泳,DL2000作为marker,用凝胶成像仪成像。