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第1章色谱分类介绍1

1.1．色谱分析原理1

1.2．分配色谱2

1.3．凝胶过滤3

目 录6

序言6

1.4．吸附色谱7

1.4.1．经典的吸附色谱9

1.4.2.离子交换色谱9

1.4.3．亲和色谱11

1.5．亲和色谱的命名14

第2章亲和色谱吸附剂设计中的基本概念16

2.1．基质16

2.1.1．理想基质的性质16

2.1.2．具有实际应用价值的基质的性质19

2.1.2.1．纤维素19

2.1.2.2．交联葡聚糖20

2.1.2.3．琼脂糖21

2.1.2.4．交联琼脂糖24

2.1.2.5．聚丙烯酰胺凝胶27

2.1.2.6．聚丙烯酰胺－琼脂糖凝胶31

2.1.2.7．多孔玻璃和陶瓷32

2.1.2.8．亲和色谱法中的其它惰性支持物36

2.2．与基质有关的问题38

2.2.1．基质的宏观环境或排阻效应38

2.2.2．微环境或空间效应39

2.2.3．间隔分子39

2.2.3.1．间隔臂的长度40

2.2.3.2．间隔臂的性质42

2.3．与间隔分子有关的问题44

2.4．配位体选择时应考虑的各种因素45

2.4.1．配位体－大分子相互作用的性质46

2.4.2．大分子与配位体的亲和力47

2.4.3．配位体和基质的连接方式49

2.4.4．配位体的浓度54

2.5．亲和吸附剂设计中的其它有关因素57

2.6．运用有关基本原理制备亲和吸附剂的实例58

第3章亲和色谱法的化学工艺61

3.1．基质的活化和功能化62

3.1.1．多糖基质62

3.1.1.1．卤化氰63

3.1.1.2．三嗪73

3.1.1.3．高碘酸盐的氧化作用74

3.1.1.4．环氧乙烷偶联76

3.1.1.5．其它双功能试剂78

3.1.1.6．其它方法80

3.1.2．聚丙烯酰胺80

3.1.2.1．聚丙烯酰胺的直接活化81

3.1.2.2．共聚技术83

3.1.3．多孔玻璃与陶瓷84

3.2．间隔臂85

3.1.4．其它支持物85

3.2.1．疏水间隔臂86

3.2.2．亲水间隔臂89

3.2.3．多价大分子的间隔分子90

3.2.4．无电荷的间隔分子91

3.3．高容量吸附剂的制备92

3.4．配位体与间隔臂的偶联反应93

3.4.1．含氨基配位体93

3.4.1.1．碳二亚胺的缩合作用94

3.4.1.2．肽键形成的其它方法97

3.4.1.3．酸酐反应97

3.4.1.4．N－羟基琥珀酰亚胺反应97

3.4.1.5．酰基叠氮化法100

3.4.1.6．异硫氰酸酯的偶联作用100

3.4.1.7．双功能试剂101

3.4.2．含羧基的配位体102

3.4.3．含芳香族功能团的配位体102

3.4.4．含醛基或酮基的配位体103

3.4.5．含羟基的配位体104

3.4.6．含硫醇基的配位体105

3.5．可逆键连接的配位体106

3.6．固定配位体浓度的测定方法107

3.6.1．差数分析107

3.6.2．直接光谱法107

3.6.3．凝胶的溶解作用107

3.6.4．酸或酶的水解作用108

3.6.5．元素分析109

3.6.6．放射性分析法109

3.6.7．其它方法109

3.7．亲和吸附剂制备中的其它因素111

第4章亲和色谱的色谱技术113

4.1．影响互补蛋白质吸附的诸因素113

4.1.2样品体积、流速和平衡时间114

4.1.1．平衡缓冲液的选择114

4.1.3．蛋白质浓度的影响116

4.1.4．温度效应116

4.2．亲和吸附剂的容量118

4.3．特异性吸附蛋白质的洗脱119

4.3.1．非特异性洗脱法121

4.3.2．特殊洗脱技术124

4.3.3．特异性洗脱技术125

4.4.1．离子效应128

4.4．非特异性吸附128

4.4.2．离子配位体131

4.4.3．疏水效应131

4.4.4．疏水配位体132

4.4.5．复合亲和力（Compound affinity）132

4.5．吸附剂的再生方法133

4.6．亲和色谱的标准134

4.7．大型制备性亲和色谱136

5.1．纯化蛋白质的特异性固定吸附剂137

第5章亲和色谱法在蛋白质及其它大分子纯化分离中的应用137

5.2．固定的通用配位体139

5.2.1．固定的腺嘌呤核苷酸辅酶139

5.2.2．其它固定核苷酸150

5.2.3．其它固定辅酶152

5.2.4．固定的核酸和多核苷酸153

5.2.5．固定的外源性凝集素158

5.2.6．固定的染料162

5.2.7．对硫醇特异的吸附剂——有机汞制剂167

5.2.8．固定的氨基酸169

5.3．从纯化的蛋白质制剂中除去微量污染物171

5.4．同工酶的分离173

第6章 亲和色谱法在纯化调节大分子和复杂生物结构中的应用176

6.1．抗原和抗体176

6.2．结合和运载蛋白180

6.3．受体蛋白182

6.4．细胞的亲和色谱185

6.5．细胞生物学中的应用188

6.6．临床应用189

第7章亲和色谱法在分析中的应用190

7.1．化学修饰的蛋白质与天然蛋白质的分离190

7.2．亲和标记活性部位的肽的纯化191

7.3．合成的肽和蛋白质的纯化193

7.4．解离常数和平衡常数的测定194

7.5．酶作用机制的探讨197

8.1．共价色谱199

第8章某些特殊的亲和色谱技术199

8.2．疏水色谱203

8.3．电荷转移及金属螯合亲和色谱208

8.4．亲和密度干扰209

8.5．亲和电泳技术209

8.6．亲和分配210

8.7．亲和组织化学212

附录213

参考文献220