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第一篇 形态学与病理学3

第一章 光学显微镜技术3

第一节 概说3

第二节 各种显微镜的性能和使用4

第三节 显微照相技术10

第四节 制片技术14

第二章 组织化学105

第一节 固定与制片105

第二节 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应107

第三节 酶组织化学135

第四节 免疫组织化学165

第五节 原位核酸分子杂交190

第六节 原位聚合酶链反应及其他原位标记技术236

第三章 电子显微镜技术241

第一节 超薄切片技术241

第二节 扫描电镜标本制备技术252

第三节 冷冻复型电镜技术260

第四节 电镜细胞化学263

第五节 免疫电镜技术279

第六节 扫描隧道显微镜标本制备技术296

第七节 电镜生物X射线微区分析技术305

第四章 定量形态学316

第一节 研究范围316

第二节 基本原理317

第三节 样本的采集及制备317

第四节 测试工具332

第五节 二维图像参数347

第六节 体视学参数359

第七节 结构成份总量计算387

第八节 数值修约和书写表达388

第九节 形态计量学参数的应用390

第十节 定量细胞化学410

第十一节 流式细胞技术413

第二篇 细胞生物学429

第一章 细胞和器官培养技术429

第一节 人和动物组织的原代培养429

第二节 培养细胞的传代431

第三节 人皮肤成纤维细胞培养432

第四节 人外周血淋巴细胞培养433

第五节 人羊水细胞培养434

第六节 人绒毛膜细胞培养435

第七节 培养细胞的冻存与复苏436

第八节 器官培养437

第九节 细胞杂交技术440

第二章 细胞生物学研究技术444

第一节 培养细胞增殖动力学分析444

第二节 体外细胞系的建立447

第三节 放射自显影技术451

第四节 缩时电影显微照相术456

第五节 培养细胞的显微注射法457

第六节 细胞骨架及核骨架技术458

第三章 细胞分离技术461

第一节 细胞分离的一般技术和注意事项461

第二节 液体样品中的细胞分离466

第三节 从组织器官分离细胞469

第四节 肝脏灌流分离肝细胞472

第五节 细胞淘洗法474

第六节 细胞电泳分离技术476

第四章 细胞通讯研究技术482

第一节 前言482

第二节 细胞通讯研究方法483

第三节 细胞通讯研究方法的应用和实验设计489

第一节 凝胶过滤层析技术493

第一章 层析技术493

第三篇 生物化学与生物物理学493

第二节 离子交换层析技术504

第三节 亲和层析技术509

第四节 吸附层析技术515

第二章 电泳技术519

第一节 电泳技术的基本原理及电泳类型519

第二节 纸电泳和醋酸纤维素薄膜电泳521

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳521

第四节 琼脂糖凝胶电泳527

第五节 等电聚焦531

第六节 细胞电泳532

第七节 毛细管电泳533

第八节 Phast系统535

第一节 利用溶解度差别的分离方法537

第三章 蛋白质分离纯化技术537

第二节 利用分子大小不同的分离纯化方法539

第三节 根据蛋白质分子带电性质不同的分离方法545

第四节 利用蛋白质吸附性质不同的分离方法549

第五节 利用蛋白质的特异性配体分离方法--亲和层析549

第四章 蛋白质分子量测定技术551

第一节 离心技术测定大分子物质的分子量551

第二节 凝胶过滤层析法测定大分子物质的分子量554

第三节 十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定大分子物质的分子量555

第五章 蛋白质定量测定技术557

第一节 凯氏定氮法557

第二节 双缩脲法558

第三节 Folin(福林)-酚试剂法(Lowry法)559

第四节 紫外分光光度法561

第五节 考马斯亮蓝G-250染色法561

第六节 BCA法562

第一节 化学分析法564

第六章 蛋白质序列分析方法564

第二节 测定核苷酸的顺序推断蛋白质的一级结构574

第七章 蛋白质折叠、磷酸化、转运和分泌的研究方法576

第一节 蛋白质折叠576

第二节 蛋白质磷酸化579

第三节 蛋白质的转运和分泌583

第八章 DNA和RNA的提取586

第一节 DNA的提取586

第二节 DNA浓度测定592

第三节 DNA的纯化592

第四节 DNA溶液的浓缩与储存594

第五节 细菌基因组DNA的储备595

第六节 RNA的提取596

第七节 从小量样品中同时提取高分子量DNA和RNA601

第一节 基本概念604

第九章 酶活力及其动力学常数的测定604

第二节 酶活力的测定方法605

第三节 同工酶的测活612

第四节 Km及Vm的测定613

第十章 生物膜研究技术616

第一节 细胞膜的分离及某些成份的生化测定616

第二节 差示扫描量热技术625

第三节 自旋标记顺磁共振波谱技术631

第四节 冰冻断裂电子显微镜技术640

第五节 荧光偏振技术648

第六节 激光拉曼技术650

第七节 核磁共振技术654

第八节 圆二色性技术657

第十一章 自由基研究技术663

第一节 生物化学方法663

第二节 化学发光法670

第三节 自旋捕捉技术676

第一节 蛋白多糖和糖胺多糖679

第十二章 细胞外间质成分的实验技术679

第二节 胶原蛋白684

第三节 弹性蛋白690

第四节 结构糖蛋白691

第四篇 分子生物学697

第一章 重组质粒697

第一节 质粒DNA的抽提与纯化697

第二节 外源DNA片段与质粒载体的重组702

第三节 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化706

第四节 重组质粒DNA克隆的筛选和鉴定712

第五节 利用粘粒载体构建基因组DNA文库718

第二章 重组噬菌体731

第一节 λ噬菌体的培养纯化和DNA的提取731

第二节 外源DNA与λ噬菌体载体重组736

第三节 重组λ噬菌体DNA的体外包装741

第四节 重组λ噬菌体DNA克隆的筛选和分析744

第五节 单链丝状噬菌体M13的繁殖及其DNA的制备749

第三章 大片段DNA分析技术755

第一节 大分子基因组DNA的制备与酶解755

第二节 脉冲场梯度凝胶电泳757

第四章 人工酵母梁色体克隆761

第一节 YAC载体761

第二节 宿主菌762

第三节 YAC文库构建的主要步骤762

第四节 YAC克隆的筛选和验证766

第五节 YAC文库的贮存767

第六节 YAC克隆的应用767

第七节 存在问题768

第五章 mRNA的统纯化和分析770

第一节 RNA提取770

第二节 mRNA纯化770

第三节 Northern印迹杂交771

第四节 DNA酶Sl分析773

第五节 RNA酶保护分析775

第六节 cDNA合成778

第七节 mRNA末端分析--RACE781

第八节 转录中止的RNA恢复延伸分析783

第六章 cDNA文库的构建787

第一节 外源双链cDNA的合成与修饰787

第二节 克隆用噬菌体载体793

第三节 双链cDNA的分子克隆797

第七章 cDNA文库的筛选和扩增801

第一节 cDNA文库的筛选801

第二节 cDNA文库的扩增808

第三节 递减杂交809

第八章 寡核苷酸引物及探针的制备813

第一节 寡核苷酸探针的设计813

第二节 寡核苷酸的合成813

第三节 寡核苷酸的纯化与质量鉴定815

第四节 寡核苷酸的标记817

第九章 DNA聚合酯链反应(PCR)819

第一节 基本原理与操作819

第二节 未知序列的扩增823

第三节 PCR产物直接测序825

第四节 PCR体外致突变826

第五节 PCR中低效非特异扩增和PCR产物夹带污染的对策828

第六节 用少量细胞直接进行聚合酶链反应829

第七节 干血样和石蜡包埋组织的PCR方法831

第八节 PCR扩增大片段DNA832

第十章 DNA限制性内切酶图谱分析834

第一节 双酶解法834

第二节 DNA-端标记加部分酶解法835

第三节 片段杂交法835

第四节 DNA复制法836

第六节 双酶解法操作步骤837

第五节 根据全序列推测法837

第七节 DNA一端标记加部分酶解法操作步骤839

第八节 片段杂交法操作步骤840

第十一章 核酸序列分析842

第一节 化学法测定DNA核苷酸序列842

第二节 末端终止法测定DNA核苷酸序列865

第三节 RNA核苷酸序列测定简介889

第十二章 重组DNA转染哺乳类细胞及其因表达产物的检测900

第一节 哺乳类基因转移的遗传选择标记900

第二节 外源基因导入哺乳类细胞的载体901

第三节 外源DNA导入哺乳类细胞的方法904

第四节 基因表达产物的检测909

第十三章 基因表达调控的研究技术917

第一节 核抽提物的制备917

第二节 DNA探针的制备919

第四节 离体DNase I足迹分析923

第三节 凝胶阻滞分析923

第五节 甲基化保护分析926

第六节 蛋白质-核酸紫外交联927

第七节 应用生物素/链亲和素系统纯化DNA结合蛋白929

第八节 滤膜结合法分离蛋白结合的DNA932

第九节 编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定934

第十节 Southwestern印迹杂交937

第十一节 DNase I超敏感位点的测定940

第十二节 氯霉素乙酰转移酶分析(CAT分析)943

第十三节 荧光素酶检测系统944

第十四节 转录起始位点的测定947

第十五节 体外转录体系948

第十四章 转基因动物技术950

第一节 原理和方法950

第二节 仪器试剂953

第三节 实验动物的规格和准备956

第四节 操作方法959

第五节 转基因动物技术中有关的分子生物学实验方法971

第六节 讨论975

第五篇 医学遗传学981

第一章 细胞遗传学研究技术981

第一节 实验室装备及常规技术981

第二节 染色体标本制备法989

第三节 高分辨染色体分析999

第四节 染色体脆位点显示1002

第五节 姐妹染色单体交换及微核1003

第六节 去透明带地鼠卵穿透试验和人精子染色体离体检测系统1005

第七节 建立永久性类淋巴母细胞样细胞系1014

第八节 间期核研究(性染色质)1016

第九节 染色体原位杂交1018

第二章 生化遗传学研究技术1028

第一节 氨基酸代谢病的筛查1028

第二节 细菌抑制法测血氨基酸--Guthrie试验1038

第三节 溶酶体酶活性测定1041

第四节 粘多糖初筛和35S参入试验1055

第三章 分子遗传学研究技术1061

第一节 DNA探针的分离和制备1061

第二节 Sorthern印迹杂交1078

第三节 PCR及相关技术在基因诊断中的应用1100

第四节 多态性连锁分析1108

第五节 亲子鉴定和个体识别1121

第六节 产前诊断与遗传咨询1128

第四章 遗传毒理学研究技术1132

第一节 概述1132

第二节 基因突变的测定1133

第三节 染色体畸变的检测1140

第四节 DNA初级损伤的检测1145

第五节 细胞转化试验1149

第六节 分子生物学技术在遗传毒理学中的应用1152