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第一章 生物大分子的提取与沉淀分离技术1

第一节 细胞破碎1

第一篇 生化分离技术1

第二节 蛋白质和酶的提取与沉淀分离3

第一节 吸附层析 19

第三节 核酸的提取与沉淀分离10

第四节 实验12

实验1-1 大肠杆菌细胞的超声波破碎12

实验1-2 枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析12

实验1-3 枯草杆菌DNA的提取与分离14

实验1-4 酵母RNA的提取与分离15

实验1-5 大蒜细胞SOD的提取与分离16

实验1-6 大鼠肝rRNA的提取与分离18

第二章 层析分离技术19

第二节 分配层析23

第三节 离子交换层析38

第四节 凝胶层析42

第五节 亲和层析46

第六节 实验47

实验2-1 蛋白质溶液的凝胶层析脱盐47

实验2-2 氨基酸的纸层析48

实验2-3 核苷酸的离子交换层析50

实验2-4 胰蛋白酶的亲和层析52

实验2-5 凝胶层析测定蛋白质的相对分子质量53

实验2-6 DNS－氨基酸的聚酰胺薄膜层析55

实验2-7 醇酯成分的气相层析57

实验2-8 胆酸混合液的薄层层析59

第三章 电泳技术60

第一节 电泳的基本原理60

第二节 纸电泳61

第三节 薄层电泳63

第四节 薄膜电泳64

第五节 凝胶电泳64

第六节 等电点聚焦电泳68

实验3-1 核苷酸的纸电泳71

第七节 实验71

实验3-2 蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳72

实验3-3 DNA的琼脂糖凝胶电泳73

实验3-4 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳75

实验3-5 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量77

实验3-6 蛋白质的二元凝胶电泳78

第四章 离心分离技术81

第一节 离心机的种类与用途81

第二节 离心方法的选择82

第三节 离心条件的确定84

第四节 实验86

实验4-1 细菌核糖体的分离86

实验4-2 大肠杆菌细胞膜的分离87

实验4-3 RNA的蔗糖密度梯度离心分离88

实验4-4 大鼠肝细胞核的分离89

第五章 化学检测技术91

第一节 糖类的化学检测91

第二篇 生化检测技术91

第二节 蛋白质和氨基酸的化学检测95

第三节 蛋白质的免疫化学检测104

第四节 核酸的化学检测106

第五节 实验108

实验5-1 斐林试剂置换法测定还原糖108

实验5-2 葡萄糖淀粉酶的活力测定109

实验5-3 微量凯氏定氮法测定总氮量111

实验5-4 福林－酚试剂法测定蛋白质含量112

实验5-5 丹磺酰化法分析蛋白质N－末端氨基酸113

实验5-6 异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序114

实验5-7 茚三酮显色法测定氨基酸含量116

实验5-8 双向免疫扩散法测定抗血清效价117

实验5-9 定磷法测定核酸含量118

实验5-10 地衣酚显色法测定RNA含量119

实验5-11 二苯胺显色法测定DNA含量120

第六章 光学检测技术122

第一节 旋光检测技术122

第二节 荧光检测技术123

第三节 分光光度检测技术126

第四节 实验127

实验6-1 旋光法测定味精的纯度127

实验6-2 荧光法测定核黄素含量128

实验6-3 荧光法测定氨基酸含量129

实验6-4 紫外吸收法测定核酸含量130

实验6-5 紫外吸收法测定蛋白质含量131

第七章 气体检测技术132

第一节 华勃氏呼吸仪检压法133

第二节 范·斯莱克检测仪测定α－氨基酸含量135

第三节 实验136

实验7-1 酵母细胞耗氧量的测定136

实验7-2 华勃氏呼吸仪测定L－谷氨酸脱羧酶活力137

实验7-3 华勃氏呼吸仪测定L－谷氨酸含量138

第八章 放射性同位素检测技术140

第一节 基本知识140

第二节 放射性同位素的检测142

第三节 放射性同位素的掺入145

实验8-1 γ-32P-ATP的酶促合成146

实验8-2 3H－蛋白质的生物合成146

第四节实验146

实验8-3 3H－蛋白质凝胶的放射荧光显影147

第九章 生物检测技术149

第一节 生物检测的主要内容149

第二节 抗生素的生物检测151

第三节 生长促进物质的生物检测152

实验9-1 卡那霉素的效价测定153

第四节 实验153

实验9-2 二环素的杀菌能力测定154

第十章 核磁共振检测技术156

第一节 核磁共振的基本原理156

第二节 核磁共振的操作要点160

第三篇 酶、基因和细胞操作技术163

第十一章 酶技术163

第一节 酶生物合成的调节163

第二节 酶反应动力学的研究167

第三节 酶、细胞和原生质体固定化技术171

第四节 酶分子修饰175

第五节 实验183

实验11-1 β－半乳糖苷酶的诱导合成183

实验11-2 无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用184

实验11-3 碱性磷酸酶的反应动力学性质185

实验11-4 L－谷氨酸脱羧酶的固定化187

实验11-5 枯草杆菌细胞固定化188

实验11-6 谷氨酸棒杆菌原生质体固定化188

实验11-7 固定化原生质体生产谷氨酸脱氢酶189

第十二章 克隆技术191

第一节 基因的获取技术191

第二节 载体的制备技术193

第三节 限制性内切核酸酶的应用195

第四节 基因重组197

第五节 细胞转化和基因表达197

实验12-1 大肠杆菌Col EI质粒的分离199

第六节 实验199

实验12-2 重组DNA的细胞转化201

第十三章 细胞和原生质体融合技术202

第一节 细胞融合202

第二节 原生质体分离204

第三节 原生质体融合205

第四节 细胞壁的再生206

实验13-2 酵母原生质体的分离与再生207

实验13-1 枯草杆菌原生质体的制备207

第五节 实验207

实验13-3 从胡萝卜细胞分离原生质体208

附录210

一、常用缓冲液的配制210

二、指示剂的配制217

三、气体检测常用的物理常数219

四、氨基酸的一些理化常数220

五、某些有机溶剂的一些物理常数221

主要参考书目222