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目录1

序1

第一章 糖1

实验一 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法1

实验二 细菌细胞壁糖的薄层层析3

实验三 葡糖-1-磷酸的制备及其8

纯度测定8

第二章 脂类11

实验四 红细胞膜的制备及其结构成分的分析11

实验五 脂质体的制备18

实验六 包裹药物脂质体的制备20

实验七 靶向脂质体的制备24

实验八 猪心肌线粒体、亚线粒体的制备及可溶性腺苷三磷酸酶的提纯25

实验九 猪心线粒体腺苷三磷酸酶复合体在脂质体上的重组29

第三章 蛋白质34

实验十 苯甲酰L-酪氨酰胺的合成34

实验十一 N-乙酰-L-酪氨酸乙酯的合成38

实验十二 双甘二肽的合成41

实验十三 胱氨酸的制备45

实验十四 总氮量的测定？微量凯氏定氮法47

实验十五 蛋白质及肽的N末端氨基酸FDNB分析法52

实验十六 蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法——聚酰胺薄膜层析技术60

实验十七 羧肽酶法测定蛋白质及肽的C末端氨基酸66

实验十八 蛋白质及肽的序列分析68

PTH分析法68

实验十九 DABITC/PITC双偶合法测定蛋白质序列72

实验二十 邻苯二甲醛荧光分析法及其在肽检测中的应用76

实验二十一 血清蛋白质的纸上电泳79

实验二十二 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离蛋白质85

实验二十三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量（Mr）100

实验二十四 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量（Mr）106

实验二十五 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点111

实验二十六 蛋白质相对分子质量（Mr）的测定——凝胶层析法116

实验二十七 细胞色素c的制备及测定124

实验二十八 鸡卵类粘蛋白的制备129

实验二十九 牛脑钙调素的分离纯化及活性测定133

［附］蛋白质含量的测136

定法：136

［附1］双缩脲法136

［附2］Folin-酚试剂法137

（Lowry法）137

［附3］考马斯亮蓝染色法138

（Bradford法）138

［附4］紫外吸收法140

第四章 酶143

实验三十 胰蛋白酶的动力学研究144

实验三十一 脲酶的动力学研究152

［附］康维微量等温蒸馏156

定氨法156

实验三十二 酰化酶Ⅰ的制备及活力测定159

［附］氨基酸含量的测定法163

［附1］茚三酮溶液显色法163

［附2］甲醛滴定法165

实验三十三 猪胰蛋白酶的结晶及167

活力测定167

实验三十四 亲和层析法纯化胰蛋白酶175

实验三十五 乳酸脱氢酶同工酶的制备及活力测定180

实验三十六 辣根过氧化物酶的制备及活力测定188

实验三十七 大肠杆菌碱性磷酸酯酶的制备192

实验三十八 羧肽酶Y的分离提纯198

实验三十九 亲和层析法分离牛脾二肽酶Ⅰ203

实验四十 亲和层析法纯化胃蛋白酶209

实验四十一 限制性内切酶EcoRI的纯化及活力测定212

实验四十二 铜锌超氧化物歧化酶的分离、纯化及其纯度鉴定217

实验四十三 利用苯甲脒-琼脂糖凝胶亲和层析法纯化尿激酶223

第五章 核酸230

实验四十四 动物肝脏RNA的制备（苯酚法）和纯度测定230

［附1］紫外吸收法测定核酸232

含量232

［附2］二苯胺显色法测定233

DNA含量233

RNA含量234

［附3］地衣酚显色法测定234

［附4］定磷法测定核酸235

含量235

实验四十五 酵母和白地霉RNA的制备（稀碱法和浓盐法）237

实验四十六 酵母转移RNA的制备238

（苯酚法）238

实验四十七 用硫氰酸胍-酚-氯仿分离提取RNA及mRNA的纯化240

实验四十八 小牛胸腺DNA的制备243

（浓盐法）243

实验四十九 细胞核的分离245

实验五十 大鼠肝细胞染色质的分离247

实验五十一 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳250

实验五十二 DNA的琼脂糖凝胶电泳253

实验五十三 脉冲电场凝胶电泳分离大分子DNA257

实验五十四 离子交换柱层析法分离核苷酸260

实验五十五 高压纸上电泳法分析鉴定核苷酸266

实验五十六 DNA重复序列与单一序列的分离——DNA的羟基磷灰石柱层析与DNA复性动力学方法269

实验五十七 肌二磷和胞二磷的化学合成275

第六章 基因工程和蛋白质工程技术281

实验五十八 质粒的分离、纯化和鉴定282

［附1］质粒DNA的小量290

制备290

一、碱裂解法291

二、煮沸法292

三、小量一步提取法293

［附2］质粒DNA的大量294

提取294

一、碱裂解法294

二、SDS裂解法295

一、氯化铯-溴乙锭梯度平衡296

超速离心法296

［附3］质粒DNA的纯化296

三、煮沸法296

二、柱层析法298

实验五十九 DNA探针的同位素299

标记法299

一、双链DNA探针的300

标记300

（一）切口移位法300

［附］DE81滤纸吸附法测定301

放射性标记的参入比301

（二）随机引物延伸法301

二、DNA末端标记法303

（一）T4噬菌体多核苷酸303

激酶标记DNA5′端303

记双链DNA3′末端305

（二）T4DNA聚合酶标305

实验六十 用光敏生物素标记核酸探针检测基因306

实验六十一 M13噬菌体载体DNA的310

重组和克隆310

实验六十二 核酸分子杂交及Southern印迹术314

实验六十三 聚合酶链式反应（PCR）技术319

实验六十四 cDNA的合成及克隆——逆转录与PCR偶联法322

实验六十五 λgtll噬菌体表达文库的筛选325

一、寡聚核苷酸探针筛325

选法325

二、免疫学筛选法329

实验六十六 DNA序列分析——化学法331

实验六十七 DNA序列分析——酶法336

一、单链DNA模板法337

二、双链DNA模板法340

实验六十八 寡聚核苷酸引物诱导的定点突变342

第七章 免疫化学346

实验六十九 动物的常规免疫和抗血清IgG类的纯化348

实验七十 双向免疫扩散法及免疫电泳351

一、双向免疫扩散测定法353

二、微量免疫电泳法356

三、对流免疫电泳359

四、单向定量免疫电泳360

（火箭电泳）360

五、双向定量免疫电泳362

实验七十一 酶联免疫吸附测定法364

实验七十二 免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白371

实验七十三 用免疫荧光法观察甲胎蛋白在人胚肝中的分布379

实验七十四 单克隆抗体技术384

一、融合用细胞的制备386

二、细胞融合388

三、杂交瘤细胞的选择390

培养390

四、特异性抗体的检测390

五、杂交瘤细胞的克隆化393

六、杂交瘤细胞的冻存395

七、杂交瘤细胞株染色体396

检测396

八、单克隆抗体的大量396

制备396

九、单克隆抗体的纯化397

十、单克隆抗体的保存401

十一、单克隆抗体Ig类型401

的鉴定401

实验七十五 固相免疫法检测抗原纯度和相对分子质量及Western印迹术403

第八章 组织代谢407

实验七十六 瓦氏呼吸计测压法及组织呼吸强度的测定407

一、瓦氏呼吸计测压法407

二、组织耗氧量的测定413

实验七十七 D-系-α-氨基酸的氧化脱氨基作用417

［附］等温蒸馏定氨法420

实验七十八 用液氮固定法研究动物的新陈代谢——自然缺氧条件下机体乳酸含量变化的测定422

实验七十九 用滤纸定量层析法研究大白鼠在自然缺氧状态下脑组织中游离氨基酸含量的变化428

第九章 放射性同位素439

实验八十 放射性焦磷酸盐（32PPi）的制备446

实验八十一 酶促合成高比放射性γ-32磷-腺苷三磷酸449

实验八十二 放射性焦磷酸（32PPi）-腺苷三磷酸交换法测定核糖核酸连接酶活性454

附录457

一、实验室安全及防护知识457

二、实验室常识458

三、玻璃仪器的洗涤及各种洗液的459

配制法459

四、缓冲溶液460

五、生物化学中某些重要化合物的468

Mr及pK值468

六、某些重要生化物质的摩尔消光系数469

七、氨基酸的一些物理常数471

八、某些蛋白质的物理性质473

九、核苷、核苷酸及其衍生物的一些物理常数473

十、某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数479

十一、指示剂479

十二、冷却剂和干燥剂481

十三、硫酸铵饱和度的常用表482

十四、测压法常用物理常数表483

十五、同位素资料485

十六、离心机转数（r/min）与相对离心力（RCF）的换算486

十七、试剂的配制及一些常用数据表486

十八、层析法常用数据表及性质491

（一）离子交换纤维素491

（二）常用离子交换树脂某些物理492

化学性质表492

（三）各类常用离子交换树脂型号495

对照表495

（四）聚丙烯酰胺凝胶的技术496

数据496

（五）琼脂糖凝胶的技术数据496

（六）各种凝胶所允许的最大496

操作压496

（七）如何选择层析介质497

总览498

（八）凝胶过滤层析介质分离范围498

（九）凝胶过滤层析介质的技术499

数据499

（十）离子交换介质在纯化步骤501

中的选择501

（十一）离子交换层析介质的501

技术数据501

（十二）疏水层析介质的技术502

数据502

（十三）亲和层析介质的技术503

数据503

（十四）反相层析介质的技术507

数据507

（十五）在位清洗和在位消毒507

（一）有关核酸的常用数据508

十九、分子生物学及基因工程常用数据508

（二）常见限制性内切酶酶切509

位点509

（三）酶类512

（四）缓冲液513

（五）贮存液517

（六）与DNA凝胶电泳有关的521

数据521

（七）细菌培养基和抗生素522

（八）杂交试验中用于降低背景526

的封闭剂526

（九）溴化乙锭溶液的净化处理527

二十、一些常用单位528

二十一、一些重要的生物化学期刊及529

手册529