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第一章 绪论1

总 论7

第二章 糖的分离和分析7

2.1糖的定量测定7

2.1.1中性糖的测定9

1.还原糖的次亚碘酸盐定量法9

2.3，5－二硝基水杨酸（DNS）比色法10

3.Somogyi-Nelson法11

4.苯酚－硫酸法11

5.蒽酮－硫酸法12

6.地衣酚－硫酸法13

8.己糖和6－脱氧己糖的比色测定14

7.戊糖的测定（地衣酚法）14

9.葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖15

2.1.2氨基己糖的测定16

1.氨基己糖的比色测定16

2.N－乙酰氨基己糖的比色测定18

3.用Ehrlich试剂测定氨基糖18

2.1.3己糖醛酸的测定20

2.2糖的色谱法21

2.2.1糖的纸色谱21

1.单糖和双糖的纸色谱21

3.多羟基醇的纸色谱28

2.寡糖和多糖的纸色谱28

4.糖酸的纸色谱29

5.氨基糖的纸色谱29

2.2.2糖的柱色谱30

1.糖的活性炭柱分离30

2.蜂蜜中寡糖的炭柱分级法31

3.糖的离子色谱法分析32

2.2.3糖的气相色谱36

1.糖的三甲基硅醚衍生物37

2.糖腈乙酸酯衍生物38

3.糖醇乙酸酯衍生物40

4.糖的三氟乙酸酯衍生物41

5.果糖和葡萄糖或甘露糖共存时的气相色谱定量法42

6.气相色谱同时测定醛糖和糖醛酸44

7.气相色谱用于微量多糖与寡糖的单糖组成分析45

2.2.4糖的高效液相色谱47

1.单糖和双糖的分析48

2.寡糖的分离和测定54

3.糖肟全苯甲酸酯紫外标记法分离和测定微量单糖和双糖57

4.脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）用于单糖和寡糖的分析59

5.芴甲氧羧基肼衍生法65

6.神经节苷脂的高效液相色谱分析（HPLC）72

2.2.5糖的薄层色谱73

2.3糖的电泳法75

1.红细胞膜上唾液酸的等速电泳76

2.多糖的滤纸电泳78

3.多糖的玻璃纤维纸电泳79

4.多糖的醋酸纤维薄膜电泳79

5.多糖的凝胶电脉80

6.单糖的高效毛细管电泳81

7.寡糖的毛细管电泳82

8.糖蛋白的高效毛细管电泳87

9.酸性多糖与寡糖的等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳89

1.糖复合物中乙酰基的测定90

2.4糖复合物中其他成分的测定90

2.糖复合物中硫酸基的测定91

第三章 复合糖化物的物化性质93

3.1多糖的纯度鉴定94

1.比旋度法94

2.超离心法95

3.高压电泳法95

4.凝胶过滤法96

3.2复合糖化物分子量的测定97

1.测定多糖分子量的方法和原则97

2.渗透压法测定多糖分子量100

3.蒸气压法测定多糖分子量102

4.端基法测定多糖分子量103

5.光散射法测定多糖分子量106

6.粘度法测定多糖分子量110

7.高效液相色谱法测定多糖分子量（1）112

8.高效液相色谱法测定多糖分子量（2）117

9.超过滤法及其在多糖化学研究中的应用120

10.凝胶过滤法测定糖蛋白和糖肽的分子量126

第四章 糖链结构分析方法128

4.1从糖蛋白分离糖链或糖肽129

1.O－糖苷键的稀碱水解（β－消除反应）129

2.N－糖苷键的肼解法130

3.N－糖苷键的三氟乙酸水解法132

4.多糖的部分酸水解133

5.糖蛋白和糖肽的部分酸水解134

6.从卵清蛋白制备糖肽136

7.酶解法从糖蛋白释放糖肽138

4.2用于结构研究的化学方法140

1.高碘酸氧化140

2.Smith降解141

3.甲基化反应（改良Hakomori法）142

4.甲基化反应（硫酸二甲酯法）144

5.微量寡糖的甲基化分析方法145

6.多糖中乙酰基的定位148

4.3糖苷酶及其在结构分析中的应用149

1.肼解法释放牛凝血酶原寡糖的顺序测定156

2.β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶－H（Endo-H）的分离纯化156

3.β－甘露糖苷酶的分离纯化159

4.一种能分解琥珀酸型聚糖的内切酶的分离纯化160

5.从土壤细菌中初步分离α－甘露糖苷酶和α（1→6）甘露聚糖内切酶161

6.枯草杆菌α－淀粉酶的分离纯化163

7.红色红曲霉α－葡萄糖苷酶的分离纯化165

8.茁霉多糖酶的分离纯化168

9.多聚半乳糖醛酸内切酶的分离纯化170

10.从分枝犁头霉制剂分离纯化α－半乳糖苷酶171

11.从产碱菌中分离纯化麦芽四糖淀粉酶173

12.从黑曲霉突变株制剂分离纯化分解生淀粉的葡萄糖淀粉酶174

13.从溜曲霉分离纯化β-N-乙酰氨基己糖苷酶177

14.几丁质酶的分离纯化179

15.菊糖酶的分离纯化181

16.真菌纤维素酶系的分离纯化183

17.木聚糖酶系的分离纯化185

18.糖苷酶的固定化186

19.硝基苯酚糖苷化合物的有机合成187

4.4用于糖链结构分析的光谱法193

1.糖的红外光谱法193

2.糖的拉曼光谱法198

4.5质谱在糖类分析中的应用201

1.过碘酸盐氧化-FAB-MB法209

2.乙基标记法214

3.直接FAB-MS法测定糖基的顺序214

4.全乙酰化低聚木糖的质谱研究217

5.全苄基化缩水内醚糖的质谱研究222

6.色质联用进行低聚糖的结构序列分析230

7.质谱法测定痕量的完整寡糖232

8.神经节苷脂的快原子质谱结构分析239

4.6核磁共振法在多糖上的应用242

4.7糖链结构研究中的免疫学方法253

1.抗原的制备254

2.抗血清的制备257

3.抗血清的处理和纯化258

4.效价的测定和糖结构分析259

第五章 糖复合物的其他研究方法263

5.1同位素标记在糖复合物微量分析中的应用263

5.2拟糖蛋白的合成和应用265

5.2.1糖与蛋白质形成共价联接的方法267

1.重氮盐偶合法267

2.重氮偶联法268

3.异硫腈酸酯法269

4.异硫氰酸苯基-α-L-岩藻糖苷和BSA的偶联270

5.还原胺化法合成拟糖蛋白271

6.寡糖天冬酰胺经茚三酮激活后用还原胺化法和蛋白质偶联273

7.还原胺化法偶联糖蛋白和蛋白质274

8.还原氨基化方法275

9.活化酰基化方法276

10.糖肽与蛋白质的偶联277

11.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（1）279

12.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（2）279

13.双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（3）281

14.脒化法合成拟糖蛋白282

5.2.2水不溶性糖类载体和蛋白质的偶联284

1.溴化氰活化法284

2.重氮法285

3.用双环氧试剂的交联法286

5.2.3拟糖蛋白的应用287

1.用于糖结合蛋白的分离和鉴定287

2.作为组织化学的标记物288

5.3多糖的化学修饰289

5.3.1非选择性化学修饰290

1.酯化290

2.甲基化293

3.O－羧甲基化，O－羧甲基纤维素钠的制备294

4.高取代度多糖磷酸单酯的制备295

6.多糖硬酯酸酯的制备296

5.多糖硫酸酯的制备296

7.羟乙基化多糖的制备297

5.3.2选择性化学修饰298

1.伯羟基的酯化298

2.伯羟基的醚化299

3.伯羟基的氧化300

4.仲羟基的氧化301

5.羧基的还原302

6.羧基的酰化303

7.N－酰化304

5.3.3末端基团的修饰305

6.1植物多糖309

各 论309

第六章 多糖309

6.1.1细胞内贮存多糖的提取和分离310

1.当归水溶性多糖的提取和分离310

2.亲和层析法分离直链淀粉和支链淀粉311

6.1.2果胶类物质的提取和分离312

1.单子叶植物细胞壁中鼠李－半乳糖醛酸聚糖的分离312

2.双子叶植物细胞壁中鼠李－半乳糖醛酸聚糖的分离313

6.1.3半纤维素的提取和分离314

1.悬浮培养细胞半纤维素的分离314

2.新鲜植物组织半纤维素的分离317

1.根部多糖的分离321

6.1.4树胶和粘胶多糖321

2.茎部多糖的分离322

3.叶中多糖的分离322

4.皮部多糖的分离323

5.花中多糖的分离324

6.种荚多糖的分离325

7.培养组织材料中多糖的分离325

8.大蒜球根部多糖的提取326

6.1.5寡糖素327

寡糖素（寡聚半乳糖醛酸）的酶法制备、纯化和活性测定327

1.粪产碱杆菌产粘变株胞外酸性多糖的纯化328

6.2微生物多糖328

2.斜顶菌（Clicoplus caespitosus PK）水溶性多糖的分离提纯329

3.香菇（Lentinus edodes）碱溶性多糖的分离提纯330

4.酵母甘露聚糖的分离提取331

5.酵母甘露聚糖的选择性乙酰解反应333

6.免疫学方法在酵母甘露聚糖结构研究中的应用334

7.树舌（Ganoderma applanatum）中色素多糖的分离制备336

6.3海藻多糖337

6.3.1褐藻多糖338

1.褐藻多糖的分析法338

2.褐藻多糖物理性质的测定345

3.褐藻胶的分离和提纯346

4.褐藻糖胶的分离和提纯347

5.褐藻淀粉（海带淀粉）的分离和提纯348

6.3.2红藻多糖348

1.红藻多糖的分析方法350

2.红藻多糖物理性质的测定355

3.琼胶的分离和提纯357

4.琼脂糖的分离和制备358

5.珠状琼脂糖的制备和提纯360

6.卡拉胶的分离和提纯360

7.1动物来源糖蛋白362

1.粘液糖蛋白的分离362

第七章 糖蛋白362

2.膜糖蛋白的分离364

3.纤维粘连蛋白的测定方法366

7.2植物来源糖蛋白368

1.中药知母（Anemarrhena asphodeloides）糖蛋白的提取和分离369

2.胡萝卜（Daucus carota L.）根细胞壁伸展蛋白的提取和分离369

3.萝卜（Raphanus sativus L.Var.hortensis backer）叶糖蛋白的提取和分离370

4.葡萄（Carignan noir CV）渣中糖蛋白的提取和分离370

第八章 蛋白聚糖372

8.1糖胺聚糖（GAG）的分离提取382

1.糖胺聚糖的一般提取方法382

2.组织中糖胺聚糖的提取383

3.透明质酸的分离提取384

4.4－硫酸软骨素的分离提取385

5.6－硫酸软骨素的分离提取386

6.软骨素的制备387

7.硫酸皮肤素的分离提取388

8.肝素的分离提取389

9.低分子肝素的制备390

10.硫酸乙酰肝素（硫酸类肝类）的分离提纯391

11.硫酸角质素的分离提取393

12.海参糖胺聚糖的分离提取394

8.2糖胺聚糖（GAG）的分析和测定396

1.糖胺聚糖乙酸纤维素膜双向电泳397

8.2.1糖胺聚糖的电泳法鉴定397

2.糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳（1）398

3.糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳（2）399

4.糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳401

5.糖胺聚糖不连续琼脂糖凝胶电泳402

6.糖胺聚糖聚丙烯酰胺凝胶电泳403

8.2.2糖胺聚糖的酶学和化学法组成鉴定404

1.糖胺聚糖的酶降解404

2.糖胺聚糖中氨基己糖的鉴别测定406

3.糖胺聚糖中己糖醛酸的鉴别测定407

4.糖胺聚糖中硫酸基／羧酸基比值测定409

5.糖胺聚糖中N－乙酰氨基己糖／己糖醛酸的比值测定410

6.糖胺聚糖中N－硫酸基／总硫酸基的比值测定411

8.2.3糖胺聚糖的定量分析413

1.凝胶过滤法测定糖胺聚糖的分子量413

2.总糖胺聚糖的含量测定413

3.混合糖胺聚糖中各聚糖相对含量测定414

4.糖胺聚糖的比色定量法414

8.2.4尿中糖胺聚糖的测定方法415

1.原子吸收法416

2.单向电泳法417

8.2.5糖胺聚糖的酶解418

1.蛋白聚糖的解聚提取419

8.3.1蛋白聚糖的提取、分离和鉴定419

8.3人主动脉蛋白聚糖（PG）的研究方法419

2.蛋白聚糖的分离420

3.蛋白聚糖（或糖胺聚糖）的鉴定423

4.蛋白聚糖中硫酸根位置的分析425

8.3.2蛋白聚糖的生物学性质的研究426

1.蛋白聚糖与外源性透明质酸（HA）的再聚集作用426

2.蛋白聚糖与脂蛋白（LP）的相互作用427

8.4培养的动物细胞中蛋白聚糖（PG）的研究方法429

1.细胞培养和标记蛋白聚糖的提取430

2.离子交换柱层析分离蛋白聚糖432

3.凝胶过滤柱层析分离蛋白聚糖432

4.氯化铯等密度超速离心法分离蛋白聚糖433

5.糖胺聚糖和寡糖的分离鉴定及蛋白聚糖的结构分析434

8.5各种来源蛋白聚糖的提取和分离437

1.软骨蛋白聚糖的提取和分离437

2.脑组织硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取和分离438

3.角膜硫酸角质素蛋白聚糖的提取和分离441

4.蛋白聚糖的部分酸水解442

5.蛋白聚糖的非特异性蛋白酶消化443

6.蛋白聚糖的特异性蛋白酶消化443

第九章 神经鞘糖脂445

9.1.1分配分离法450

1.Suzuki改良Folch分配法450

9.1神经节苷脂的的分离和纯化450

2.Ladisch分配法451

9.1.2离子交换法453

9.2神经节苷脂的鉴定455

9.2.1神经节苷脂的定量——唾液酸含量的测定455

1.间苯二酚－盐酸法455

2.过碘酸间苯二酚法456

3.硫代巴比妥酸法456

9.2.2薄板层析（TLC）法457

9.2.3高效薄板层析（HPTLC）板放射免疫分析法458

9.2.4毛细管气相色谱法459

1.未衍生神经节苷脂的高压液相色谱461

9.2.5神经节苷脂的高压液相色谱（HPLC）分析461

2.神经节苷脂衍生物的高压液相色谱462

9.2.6神经节苷脂的高效毛细管电泳分析464

9.3中性糖脂的分离和纯化466

9.4鞘糖脂抗体的制备和鉴定467

第十章 凝集素470

10.1凝集素的分离、纯化和鉴定474

10.1.1天然的或修饰的聚糖作亲和吸附剂475

1.伴刀豆凝集素（ConA）的纯化477

2.蓖麻凝集（RCA1）的纯化478

3.麦胚凝集素（WGA）的纯化479

4.花生凝集素（PNA）的纯化480

10.1.2结合载体的糖蛋白或糖肽作亲和吸附剂481

1.植物血凝素（PHA）的纯化483

2.麦胚凝集素（WGA）的纯化484

10.1.3结合载体的单糖或双糖作亲和吸附剂484

1.大豆凝集素（SBA）的纯化488

2.蓖麻蚕血淋巴凝集素（PLL1）的纯化489

3.花生凝集素（PNA）的纯化490

10.1.4细胞膜凝集素的纯化490

10.1.5凝集素的疏水层析492

10.1.6鉴定凝集素的一般方法493

1.血凝活力的鉴定493

2.凝集素糖结合活性的定量测定方法494

4.糖蛋白鉴定495

3.纯度鉴定495

10.1.7凝集素分离鉴定的技术准备497

1.Sepharose的酸处理497

2.甲状腺球蛋白－Sepharose的制备497

3.卵粘蛋白－Sephsrose的制备498

4.半乳糖胺-CH-Sepharose的制备498

5.GalNAc-Epoxy-Sepharose的制备499

6.Rha-Sepharose4B的制备499

7.乳糖－淀粉凝胶亲和吸附剂的制备499

10.2凝集素衍生物的制备500

10.2.1标记凝集素的制备500

9.麦芽糖－淀粉凝胶的制备500

8.固定化红血球500

1.放射性标记凝集素501

2.酶标记凝集素504

3.荧光标记凝集素506

4.生物素（biotin）标记凝集素508

5.铁蛋白标记凝集素509

6.胶体金－凝集素复合物的制备510

10.2.2固定化凝集素的制备510

1.Con A-Sepharose4B的制备510

3.Con A-Sepharose 6B的制备（氰基硼氢化钠法）511

2.RCA-Sepharose 4B的制备（带己二胺“臂”）511

4.溴化氰活化法制备固相化凝集素512

10.3凝集素在生物科学和医学研究中的应用513

10.3.1用固定化凝集素分离纯化糖蛋白514

1.白扁豆β－N-乙酰氨基己糖苷酶的分离纯化514

2.猪大网膜脂肪细胞膜糖蛋白的分离纯化515

3.血型物质MN抗原的纯化517

4.用Con A-Sepharose 4B分离ConA亲和蛋白517

5.固相化凝集素的强化518

10.3.2用凝集素检测糖复合物并推测其寡糖结构520

1.测定溶液中的糖复合物520

2.测定细胞膜和亚细胞结构上的糖复合物526

10.3.3固定化凝集素亲和层析分离分析寡糖和糖肽530

1.序列凝集素柱结合糖苷水解酶分析N－糖肽531

2.GS-I-Con A-Sepharose柱分离带aGal－末端的寡糖535

10.4内源凝集素537

10.4.1内源凝集素的检测537

1.蛋白质制造技术测定水溶性内源凝集素537

2.免疫组织化学方法测定细胞中的内源凝集素538

10.4.2内源凝集素的与分离纯化539

1.水溶性内源凝集素的分离纯化539

2.细胞膜内源凝集素的分离纯化540

后记541