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第一章病毒和立克次氏体病实验诊断的基本概念和方法1

一、概述1

二、原液的配制2

三、实验诊断方法7

1．显微镜检查7

2．病毒分离7

3．血清学试验13

（一）补体结合试验13

（二）血球凝集抑制试验13

（三）中和试验15

（四）凝集试验15

（1）特异性凝集试验15

（2）非特异性凝集试验15

四、标本的收集和保存17

1．采取标本的时间18

2．标本的收集18

3．运送18

4．保存18

五、滤器的使用和清洁18

1．种类18

2．清洁和灭菌19

六、病毒的保存20

1．低温冷冻保存20

2．保存于50％甘油中21

3．真空干燥保存22

七、半数致死量的测定25

1．意义25

2．操作方法25

3．确定LD50值的几种方法27

4．LD50在中和试验中的应用28

（一）固定血清、稀释病毒的方法28

（二）固定病毒、稀释血清的方法30

附录一病毒实验室工作的安全规则31

附录二 病毒立克次氏体检验室一般所需设备和用具31

第二章动物实验35

一、概述35

二、用途36

三、动物的选择37

四、实验动物的编号38

五、实验动物的观察与照料39

六、动物接种法41

1．鼻内接种41

2．皮内接种42

3．皮下接种42

4．腹腔内接种42

5．颅腔内接种42

6．静脉内接种43

（一）家兔43

（二）豚鼠43

（三）小白鼠43

（四）大白鼠43

七、动物采血法44

1．家兔44

2．豚鼠44

3．小白鼠45

4．大白鼠45

5．鸡及鸽子45

八、感染动物的解剖46

九、培养病毒的种类47

十、常用实验动物的自发性传染病47

1．细菌性疾病47

2．病毒性疾病49

3．其他51

4．动物体外寄生虫的控制51

第三章鸡胚培养52

一、鸡胚的发育52

二、材料设备54

1、卵54

2．孵卵器54

3．检卵灯及暗室55

4．开卵钻及磨牙机55

5．卵盘55

6．接种罩及紫外线灯55

7．其他55

三、鸡胚培养注意事项56

1．无菌技术56

2．细心谨慎的操作56

3．保持培养条件56

4．无菌试验56

四、操作技术57

1．鸡卵的保存、孵育及检卵57

2．各种途径的鸡胚接种方法57

（一）卵黄囊接种法57

（二）绒毛尿囊膜接种法58

（三）尿囊接种法59

（四）羊膜腔接种法60

（五）静脉接种法61

（六）脑内接种法62

五、总结表62

第四章组织培养64

一、概述64

二、用具的规格，洗涤和消毒65

1．玻璃器皿65

2．橡皮管和橡皮塞66

3．组织搅碎器66

4．解剖用具66

三、各种溶液、血清、浸出液的准备、消毒、保存和使用66

1．Hanks液66

2．Earle氏液67

3．磷酸缓冲盐水68

4．199综合培养基68

5．Eagle氏营养液74

6．鸡胚浸出液75

7．牛胚浸出液76

8．血清76

9．鸡血浆78

10．羊水79

11．0.02％乙二胺四乙酸二钠溶液79

12．？蛋白酶溶液80

13．抗菌素80

14．0.5％乳蛋白水解物80

四、培养方法80

1．单层细胞培养81

（一）HeLa细胞81

（二）Detroit-6细胞84

（三）人胎盘羊膜细胞85

（四）猴肾上皮细胞86

（五）鸡胚细胞88

（六）鸡胚肝脏细胞89

2．组织块培养90

五、染色方法92

六、总结表94

第五章流行性乙型脑炎（包括淋巴球脉络丛脑膜炎）96

一、概述96

二、血清学试验96

1．补体结合试验96

（一）1.25％羊血球悬液的配制96

（二）溶血素97

（三）补体98

（四）抗原99

（五）免疫血清的制备101

（六）血清103

（七）致敏羊血球悬液103

（八）试验步骤106

附：微量补体结合试验操作方法106

（一）标本的采取106

（二）试验108

2．血球凝集抑制试验111

（一）0.01M磷酸缓冲盐水（pH6.4）的制备112

（二）0.25％小鸡血球悬液112

（三）流行性乙型脑炎血凝素的制备112

（四）血清的处理112

（五）试验步骤113

3．中和试验114

（一）动物114

（二）血清114

（三）病毒114

（四）方法114

三、病毒的分离和鉴定115

1．分离115

（一）标本115

（二）悬液的制备115

（三）动物115

（四）接种116

（五）观察116

（六）传代116

2．鉴定116

（一）初步鉴定116

（二）最后鉴定117

（1）动物感染范围117

（2）交互中和试验118

（3）交互补体结合试验118

（4）交互保护试验118

四、流行性乙型脑炎的早期诊断118

第六章脊髓灰白质炎119

一、概述119

二、分离和鉴定120

1．标本120

（一）标本的收集和保存120

（二）标本的运送121

（三）标本的处理121

2．分离122

（一）接种122

（1）猴子122

（2）组织培养122

（二）观察123

（1）猴子123

（2）组织培养123

3．鉴定124

（一）免疫血清124

（二）中和试验125

4．快速鉴定127

5．分离和鉴定脊髓灰白质炎及其他肠道病毒的程序127

三、血清学试验127

1．中和试验127

2．补体结合试验129

3．结果的解释129

第七章狂犬病131

一、概述131

二、实验室工作人员应注意之点131

三、标本来源132

1．临床标本132

2．尸检标本132

四、组织病理诊断132

五、病毒的分离和鉴定133

六、血清学诊断134

第八章流行性腮腺炎134

一、概述134

二、病毒的分离和鉴定135

1．标本采集和运送方法135

2．标本处理及病毒分离鉴定135

（一）标本处理方法135

（二）标本接种及病毒分离鉴定方法135

（1）鸡胚羊膜腔接种法135

（2）组织培养136

三、血清学试验136

1．补体结合试验136

（一）抗原的制备137

（1）病毒抗原（V抗原）137

（2）可溶性抗原（S抗原）137

（3）对照抗原137

（二）免疫血清制备137

（三）试验方法138

（四）结果判定138

2．血凝抑制试验138

（一）血凝素139

（二）病人血清139

（三）鸡血球悬液139

（四）操作方法139

（五）结果的解释139

第九章流行性感冒140

一、概述140

二、血清学试验140

1．血球凝集试验和血球凝集抑制试验140

（一）血球凝集试验140

（1）材料141

（2）操作方法141

（3）注意事项142

（二）血球凝集抑制试验143

（1）材料143

（2）血清处理法144

（3）操作方法144

（4）注意事项146

2．补体结合试验146

（一）抗原的制备146

（1）可溶性抗原146

（2）病毒抗原146

（二）血清147

（三）免疫血清的制备147

（四）操作方法148

三、分离病毒148

1．标本的收集148

2．用鸡胚羊膜腔接种法分离病毒148

（一）注射液的准备148

（二）羊膜腔接种149

（三）孵育149

（四）收获羊水149

（五）测定羊水的血球凝集素149

（六）血凝反应真假阳性之判别149

（七）继续传代150

四、新分离病毒型别的初步鉴定151

1．血凝抑制试验151

2．补体结合试验151

五、关于排除实验室污染的可能应采取的措施152

六、毒种的传代和保存153

1．传代方法153

2．毒种保存方法153

（一）冷冻干燥保存153

（二）低温冰箱保存154

（三）普通冰箱保存154

七、流行性感冒病毒株的命名154

附录：霍乱滤液的制造和效力的测定方法156

第十章腺病毒感染的诊断159

一、概述159

二、病毒的分离和鉴定159

1．咽？与咽拭子液159

2．组织培养159

3．分离病毒160

4．病毒的鉴定160

（一）动物试验161

（二）对乙醚的抵抗力161

三、血清学试验161

1．中和试验161

2．补体结合试验162

3．免疫血清的制备162

第十一章天花和牛痘163

一、概述163

二、病毒的分离和鉴定163

三、快速诊断164

四、Paul氏反应165

五、血清学诊断166

第十二章单纯痘疹167

一、概述167

二、病毒的分离和鉴别168

1．鸡胚培养168

2．动物试验168

三、血清学诊断169

第十三章常见立克？氏体病的实验诊断170

一、概述170

二、立克次氏体实际操作时的注意点170

三、立克次氏体的分离方法171

1．检验标本的收集和接种171

（一）病人标本171

（二）由节肢动物及动物宿主分离立克次氏体171

2．应用动物分离立克次氏体172

（一）豚？172

（二）小白鼠173

3．毒种在动物体内连续传代173

4．鸡胚接种及传代173

（一）接种及观察173

（二）解剖及传代174

（三）无菌试验174

5．毒株的保存175

6．立克次氏体的染色和镜检176

四、立克次氏体的血清学诊断176

1．外斐氏反应176

（一）抗原的制备176

（二）操作方法177

2．补体结合试验177

（一）立克次氏体颗粒性抗原的制备179

（二）可溶性抗原的制备179

五、免疫保护试验180