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目录1

第一章 病毒的基本特性与传染免疫1

一、病毒的大小和形态2

二、病毒的结构与化学组成3

三、病毒的寄生性与繁殖过程4

四、病毒的遗传与变异5

五、病毒的传染与免疫5

六、病毒的抵抗力10

七、病毒的分类12

第二章 病毒学实验诊断常用技术17

一、概述17

二、实验室注意事项17

三、常用洗涤、消毒和处理方法18

四、光学显微镜技术20

五、滤器及其使用22

六、标本收集、运送和保存26

七、病毒分离30

八、病毒鉴定31

九、病毒的滴定及其应用36

十、血清学诊断42

十一、病毒快速诊断47

第三章 电子显微镜技术50

一、电子显微镜50

二、电子显微镜技术在病毒学中的应用55

(一)标本支持膜与超薄切片55

(二)负染色技术62

(三)投影技术(真空喷镀)63

(四)复型法64

(五)背散射扫描65

(六)免疫电显技术65

(七)酶标记免疫电镜72

(八)放射自显影技术74

(九)冰冻蚀刻技术75

(十)核酸分子的观察75

第四章 组织培养技术77

一、病毒学诊断中使用细胞培养的种类78

二、在细胞培养中测定病毒的繁殖80

三、体外细胞培养物的制备83

(一)培养液83

(二)新鲜组织的处理与贮存90

(三)细胞分散技术91

(四)细胞计数97

(五)各种细胞培养物的制备97

1.人源细胞97

2.猴源细胞117

3.啮齿类源细胞120

4.鸡胚细胞122

四、用细胞培养物分离病毒124

(一)接种标本之处理124

(二)病毒培养物的孵育125

(三)在组织培养中病毒作用的识别132

五、在单层细胞上滴定病毒的TCD50终点133

六、病毒蚀斑技术134

七、组织培养系统中的中和试验141

八、组织培养制备血清学抗原153

九、细胞培养物的保存、贮藏及运输160

十、细胞培养物中的支原体污染163

(一)细胞培养物中支原体的检查164

1.培养基164

2.分离培养165

3.检查支原体集落166

(三)从细胞培养物中清除支原体167

(二)防止支原体污染细胞培养物167

4.支原体的移种167

十一、组织培养设备和试剂169

(一)玻璃器皿169

(二)塑料培养瓶171

(三)橡皮类171

(四)杂项171

十二、附录173

(一)培养液和试剂173

1.抗菌素和抗霉素溶液173

2.平衡盐溶液及缓冲盐溶液174

(1)Earle平衡盐溶液174

(2)Hanks平衡盐溶液174

(3)磷酸盐缓冲液175

(4)PH7.5磷酸盐缓冲液175

3.缓冲溶液—碳酸氧钠176

(6)Puck盐水176

(5)无钙、镁离子的磷酸盐缓冲液176

4.细胞分散剂177

5.50%鸡胚浸液177

6.指示剂及染色液177

7.营养培养液178

(1)Eagles最低必要成分培养液(MEM)178

(2)水解乳白蛋白—酵母浸液培养液182

(3)Leibvitz-15号培养液(L-15)182

(4)199培养液184

(5)RPMI1640培养液191

8.营养液194

(1)20%葡萄糖194

(2)5%水解乳白蛋白生理盐水194

9.血清194

(二)培养液的除菌过滤194

一、病毒提纯一般原则196

第五章 分子生物学实验技术196

第一节 病毒的提纯196

二、物理提纯法197

三、化学提纯法201

四、血清学提纯法204

五、电泳提纯法204

六、液体两相分配系统法204

第二节 病毒的大小及其分子量的测定205

一、超速离心沉淀法205

二、微孔薄膜过滤法208

第三节 细胞成分的分离提纯211

一、收集细胞211

四、离心分离法212

五、细胞成分提取法212

三、细胞成分分离212

二、细胞粉碎方法212

六、线粒体、溶酶体、微粒体的精制214

七、无菌染色体的分离217

八、细胞核和染色质的制备217

九、病毒感染所致染色体畸变与体外培养制备染色体标本219

第四节 病毒核酸亚单位的分离与测定224

一、病毒DNA的分离和测定224

二、病毒RNA的分离和测定227

第五节 病毒蛋白质亚单位的分离和测定232

一、病毒蛋白质亚单位的分离232

二、病毒蛋白质的测定233

第六节 核酸分子杂交234

一、概述234

二、意义235

三、核酸的分离提取237

四、核酸分子杂交方法241

第七节 RNA-DNA分子杂交法对病毒诊断的应用243

一、基本原理244

二、材料245

三、原位杂交方法246

四、结果247

第八节 病毒的遗传变异248

一、变异剂与诱异变异248

二、温度敏感性变异株的分离和鉴定251

第六章 病毒免疫化学技术256

第一节 免疫球蛋白的分离和提纯256

一、概述256

二、IgG的提取256

三、分泌IgA的提取260

四、IgM的提取261

五、IgE的提取262

六、连续提取免疫球蛋白法264

一、凝胶过滤265

第二节 凝胶过滤与离子交换层析法265

二、离子交换层析法269

第三节 亲和层析纯化法272

第四节 盘状电泳276

第五节 醋酸纤维膜电泳284

第六节 免疫球蛋白的鉴定287

第七章 细胞免疫实验291

第一节 白细胞的吞噬功能测定291

第二节 淋巴细胞有关的实验方法293

第三节 淋巴素实验法299

第八章 免疫荧光技术305

一、荧光显微镜305

二、免疫荧光技术程序307

三、免疫荧光试剂制备308

3.荧光素标记抗体方法310

2.免疫球蛋白的提取310

1.荧光素310

4.去除非特异性荧光染色的方法312

四、荧光抗体染色法314

五、荧光显微镜检查337

六、荧光分带技术337

第九章 酶标记免疫技术342

一、概述342

二、原理与分类343

(一)不均—酶标记免疫试验344

(二)均—酶标记免疫试验348

三、器材与试剂349

(一)固相载体349

(二)抗原351

(三)抗体351

(六)洗涤液352

(五)血清(样品)352

(四)抗原结合片段(Fab)的制备352

(七)酶353

(八)酶结合物制备354

(九)底物362

(十)间接法测定抗体所需的器材与试剂364

四、酶标记免疫试验方法366

(一)均—酶标记免疫试验366

(二)不均—酶标记免疫试验366

(三)预备试验368

1.酶结合物最适浓度测定368

2.抗原最适浓度测定368

3.底物最适时间测定369

(四)正式试验370

1.间接法检测抗体370

2.双抗体夹心法检测抗原371

4.竞争性酶标记免疫试验检测抗原373

3.酶标记抗原竞争法检测抗原373

5.特定抗原基质球(DASS)法374

6.酶标记免疫组织抗原定位法379

7.无标记抗体酶(NLAbE)法381

8.可溶性酶—抗酶复合物(PAP)法381

9.四步抗体法383

10.组织固定法383

11.免疫球蛋白桥免疫显色法387

12.可溶性酶—抗酶显色法388

五、在病毒学中的应用389

第十章 鸡胚培养法390

一、具材390

二、鸡卵的选择与孵育390

三、接种与收获391

(二)尿囊腔接种法393

(一)绒毛尿囊膜接种法393

(三)卵黄囊接种法394

(四)羊膜腔接种法395

第十一章 动物实验法396

一、动物接种法396

(一)皮内接种396

(二)皮下接种396

(三)腹腔接种396

(四)脑内接种397

(五)静脉接种397

(六)鼻腔接种398

二、动物采血法398

(一)心脏采血398

(二)羊颈外静脉采血399

(三)颈动脉放血399

三、动物解剖法399

腺病毒属400

第十二章 腺病毒403

一、概述403

二、诊断程序404

三、标本采取与处理404

四、免疫荧光快速诊断404

五、病毒分离405

六、病毒鉴定405

七、血清学诊断411

八、诊断要点411

疤疹病毒属411

第十三章 单纯疱疹病毒413

一、概述413

二、诊断程序413

三、标本采取与处理414

四、免疫荧光快速诊断414

五、酶标记免疫试验415

六、病毒分离416

七、病毒鉴定417

八、血清学诊断419

九、诊断要点420

第十四章 水痘——带状疱疹病毒421

一、概述421

二、诊断方法421

(一)标本采取与处理421

(二)显微镜检查422

(三)免疫荧光快速诊断423

(四)酶标记免疫试验423

(五)病毒分离424

(六)病毒鉴定424

(七)血清学诊断424

三、诊断要点425

一、概述427

第十五章 巨细胞病毒427

二、诊断方法428

(一)标本采取与处理428

(二)临床标本直接观察428

(三)病毒分离429

(四)病毒鉴定430

(五)酶标记免疫试验433

三、血清学诊断434

四、诊断要点436

第十六章 EB病毒438

一、概述438

二、诊断方法438

(一)病毒分离438

(二)EBV感染引起的细胞转化438

(三)EBV持续感染细胞株的建立440

(四)EBV基因组在细胞内的存在形式441

(五)EBV的定量法442

(六)免疫荧光试验443

(七)酶标记免疫试验444

(八)嗜异性凝集试验445

(九)血清学诊断446

三、诊断要点447

痘病毒属448

第十七章 天花病毒与痘苗病毒450

一、概述450

二、诊断程序450

三、标本采取与运送451

四、显微镜检查452

五、病毒分离与鉴定453

(一)鸡胚绒毛尿囊膜接种453

(二)血凝抑制试验454

(一)补体结合试验454

(三)动物接种分离法454

六、血清学诊断454

(二)组织培养分离法454

(三)絮状沉淀试验456

(四)酶标记免疫试验457

七、诊断要点458

肠道病毒属458

第十八章 脊髓灰质炎病毒462

一、概述462

二、标本采取与处理462

三、免疫荧光快速诊断463

四、酶标记免疫试验464

五、病毒分离465

六、病毒鉴定466

七、诊断要点473

二、病毒分离474

一、概述474

第十九章 柯赛基病毒474

三、病毒鉴定476

四、血清学诊断476

五、诊断要点477

第二十章 艾可病毒479

一、概述479

二、病毒分离479

三、病毒鉴定479

四、诊断要点481

鼻病毒属482

第二十一章 鼻病毒482

一、概述482

二、标本采取与处理482

三、病毒分离482

(一)中和试验484

四、病毒鉴定484

(二)补体结合试验485

(三)生物学特性测定486

(四)酶标记免疫试验488

五、诊断要点488

第二十二章 口蹄疫病毒490

一、概述490

二、病毒分离与鉴定490

三、血清学诊断491

虫媒病毒属492

第二十三章 流行性乙型脑炎病毒495

一、概述495

二、诊断程序496

三、标本采取与处理496

四、免疫荧光快速诊断498

六、病毒分离499

五、酶标记免疫试验499

七、病毒鉴定501

八、血清学诊断501

九、诊断要点515

第二十四章 森林脑炎病毒516

一、概述516

二、病毒分离与鉴定516

三、血清学诊断517

四、诊断要点517

第二十五章 流行性出血热病毒518

一、概述518

二、病毒分离与鉴定519

三、血清学诊断520

正粘病毒属521

二、流感病毒的结构、抗原成分与功能522

一、概述522

第二十六章 流行性感冒病毒522

三、流感病毒的命名524

四、诊断程序526

五、标本采取与处理526

六、免疫荧光快速诊断527

七、酶标记免疫试验529

八、病毒分离531

(一)鸡胎培养分离法531

(二)组织培养分离法532

九、病毒鉴定533

(一)血凝抑制试验533

(二)补体结合试验533

十、血清学诊断534

(一)血凝试验534

(四)毒种的保存534

(三)酶标记免疫试验534

(二)血凝抑制试验538

(三)血凝抑制试验加敏法540

(四)微量血凝和血凝抑制试验540

(五)神经胺酸酶和神经胺酸酶抑制试验543

(六)酶标记免疫试验547

(七)补体结合试验547

(八)单扩溶血试验554

十一、诊断要点562

副粘病毒属564

第二十七章 麻疹病毒565

一、概述565

二、病毒分离565

三、病毒鉴定566

四、血清学诊断566

(一)血凝抑制试验566

(二)微量血凝抑制试验569

(四)酶标记免疫试验576

(三)补体结合试验576

五、诊断要点577

第二十八章 流行性腮腺炎病毒578

一、概述578

二、诊断程序578

三、标本采取与处理578

四、病毒分离579

(一)组织培养分离法579

(二)鸡胚培养分离法579

五、病毒鉴定580

(二)血凝抑制试验581

(四)酶标记免疫试验581

(三)单扩溶血试验581

(一)补体结合试验581

六、血清学诊断581

七、诊断要点582

第二十九章 副流感病毒583

一、概述583

二、病毒分离583

三、病毒鉴定585

四、血清学诊断586

(一)血凝试验587

(二)血凝抑制试验588

(三)中和试验588

(四)补体结合试验589

(五)酶标记免疫试验589

五、诊断要点592

三、标本采取与处理593

二、诊断程序593

第三十章 呼吸道合胞病毒593

一、概述593

四、病毒分离594

五、病毒鉴定595

六、血清学诊断596

七、诊断要点597

第三十一章 新城疫病毒598

一、概述598

二、病毒的致病力和病毒株分类598

三、新城疫病毒的生物学特性599

四、病毒分离与鉴定601

五、血清学诊断602

一、概述605

二、日冕形病毒的特性605

日冕形病毒属605

第三十二章 日冕形病毒605

三、引起呼吸道感染的病毒类型607

四、诊断程序609

五、病毒分离611

六、呼吸道感染病毒的鉴定615

七、血清学诊断615

二、诊断方法618

(一)标本采取与处理618

第三十三章 呼肠孤病毒618

一、概述618

呼肠孤病毒属618

(二)病毒分离619

(三)病毒鉴定620

三、血清学诊断622

四、诊断要点623

弹状病毒属624

一、概述625

二、病毒分离与鉴定625

第三十四章 水疤性口膜炎病毒625

三、血清学诊断626

第三十五章 狂犬病毒627

一、概述627

二、诊断程序627

三、标本采取与运送627

四、显微镜检查628

六、病毒鉴定629

五、病毒分离629

七、血清学诊断630

(一)中和试验630

(二)补体结合试验630

(三)微量血凝抑制试验630

(四)免疫荧光快速诊断630

(五)酶标记免疫试验631

八、诊断要点632

二、病毒分离634

一、概述634

嵌沙样病毒属634

第三十六章 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒634

三、病毒鉴定636

四、免疫荧光快速诊断637

五、酶标记免疫试验637

六、诊断要点638

其它病毒属639

第三十七章 风疹病毒639

一、概述639

二、诊断程序639

三、病毒分离640

四、病毒鉴定642

五、血清学诊断644

六、诊断要点651

一、抗原提取法653

第三十八章 肝炎病毒653

第一节 甲型肝炎抗原653

二、免疫粘附血凝试验654

三、免疫电镜检测656

第二节 乙型肝炎抗原656

一、琼脂双相扩散试验657

二、对流免疫电泳试验658

三、放射免疫电泳660

四、间接血凝试验662

五、反向间接血凝试验664

六、免疫粘附血凝试验664

七、酶标记免疫试验665

八、诊断要点666

第三十九章 肿瘤病毒667

一、概述667

二、肿瘤病毒的类型和特性667

(一)病毒类型668

(二)肿瘤病毒的特性669

三、人肿瘤病毒病因与研究方案671

(一)研究人肿瘤病毒的方案672

(二)几类可疑的人肿瘤病毒672

四、研究人肿瘤病毒的有关技术681

(一)流行病学681

(二)电镜检查682

(三)细胞培养682

(四)免疫学方法684

(五)生物化学与分子生物学684

(六)病毒的诱导或活化684

(七)病毒鉴定684

(八)病毒的致癌性685

(九)疫苗预防685

编译后记686

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