《核酸探针杂交实验技术》

第一章总论1

第一节 分子杂交技术1

第二节 从血液中提取DNA12

第二节 探针实验主要因素的优化3

第三节 从组织中提取DNA14

第四节 细菌DNA的提取15

第三节 核酸探针的应用6

第五节 RNA的提取16

第二章核酸样品的制备9

第一节 核酸的提取与沉淀9

第六节 从其他来源标本中提取核酸22

第七节 原位杂交中组织和细胞标本的制备24

第三章DNA重组和核酸探针的制备33

第一节 载体-受体系统33

第二节 目的基因的获得35

第三节 DNA分子的体外重组36

第四节 转化与感染39

第五节 重组克隆的筛选40

第六节 核酸探针的制备41

第四章放射性标记核酸探针53

第一节 酶促标记DNA54

第二节 寡核苷酸探针的标记60

第三节 放射性标记探针的纯化64

第五章非放射性标记核酸探针69

第一节 酶促修饰69

第二节 化学修饰76

第三节 寡核苷酸探针的标记82

第六章杂交类型和检测方法89

第一节 杂交膜的制备89

附录A试剂191

第二节 DNA Southern印迹杂交92

第三节 RNA Northern印迹杂交95

第四节 菌落和噬菌斑筛选法97

附录B附加方案198

第五节 膜杂交方法98

第六节 原位杂交方法105

第七节 检测液相靶序列的杂交类型116

第七章 核酸的体外扩增技术126

第一节 聚合酶链反应126

第二节 转录依赖的扩增系统136

第三节 3SR系统137

第四节 连接酶链反应138

第五节 探针的扩增——０β复制酶系统139

第六节 信号的放大141

第八章 核酸杂交的电镜观察143

第一节 杂交体的形成143

第二节 核酸在蛋白膜上的展开146

第三节 电镜观察149

第九章 液相杂交的定量分析151

第一节 二级反应151

第二节 二级理论在核酸复性反应中的应用153

第三节 多元复性反应156

第四节 RNA-DNA滴定曲线的分析159

第五节 影响反应速率的因素160

第六节 复性反应的测定技术163

第十章 膜杂交的定量分析168

第一节 膜杂交的简要动力学168

第二节 膜杂交速率的影响因素169

第三节 影响杂种稳定性的因素171

第四节 相关序列间的辨别172

第五节 核酸与膜的结合174

第六节 杂种的检测和定量测定177

第七节 最佳反应条件的确定178

第八节 Tm值的测定及意义180

第九节 滤膜和探针的再使用181

第十节 放射性膜杂交的问题及分析181

第十一章 分析RNA的杂交法183

第一节 Northern印迹杂交183

第二节 RNA点印迹杂交法185

第三节 核酸酶S1绘图法185

第四节 引物延伸法188