《核酸研究技术 上》

目录1

第一部分 DNA的提取与纯化1

引言1

第一章 细胞总DNA的分离提取 袁建刚3

第一节 从培养的动物细胞中提取高分子量DNA3

第二节 细菌细胞DNA的提取6

第三节 从动物组织制备高分子量DNA8

第二章 DNA的羟基磷灰石柱层析与DNA复性研究方法 袁建刚12

第一节 DNA的羟基磷灰石柱层析12

第二节 DNA复性动力学简介15

第三节 与DNA复性研究有关的一些实验方法20

第三章 质粒DNA的大量抽提与纯化 王年26

引言26

第一节 菌体的培养和质粒DNA的扩增27

第二节 菌体的裂解28

第三节 质粒DNA的纯化30

第四章 λ噬菌体DNA的制备 强伯勤36

第一节 裂解生长的λ噬菌体的感染及其纯化36

第二节 溶原型噬菌体的诱导及其纯化40

第三节 λDNA的抽提41

第五章 动物病毒的组织培养及核酸提取 王淑凤43

第一节 动物病毒的组织培养技术43

第二节 病毒的提纯和病毒核酸的提取48

第三节 病毒培养常用溶液的配制52

参考文献55

第二部分 真核生物mRNA的分离、纯化与鉴定57

引言57

第一章 真核生物mRNA的分离与纯化 张福徽58

第一节 从聚核蛋白体中分离RNA58

第二节 从细胞内直接分离RNA59

第三节 mRNA的纯化62

第四节 注意事项64

第二章 mRNA的鉴定 张福徽66

第一节 琼脂糖凝胶电泳法66

第二节 无组胞体系蛋白质的生物合成66

第三节 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析68

第四节 免疫沉淀法70

参考文献70

第三部分 限制性内切酶及其应用72

第一章 限制性内切酶 强伯勤余曙华72

第一节 酶的命名、分类和识别特异性72

第二节 限制性内切酶的纯化方法79

第三节 酶活力的测定和制剂质量检验84

第四节 酶的反应条件和影响酶活性的因素87

第二章 限制性内切酶的应用 余曙华强伯勤100

第一节 DNA的酶切降解和再连接101

第二节 DNA物理图谱分析107

第三节 限制性内切酶降解DNA的有关公式112

参考文献115

第四部分 核酸的凝胶电泳116

第一章 DNA的凝胶电泳 杨善蓉116

第一节 电泳装置和基本技术116

第二节 DNA凝胶电泳的应用123

第三节 从凝胶上回收DNA片段125

第二章 RNA的电泳 王申五129

第一节 聚丙烯酰胺凝胶电泳129

第二节 RNA乙二醛变性琼脂糖凝胶电泳134

参考文献138

第五部分 核苷酸序列分析139

第一章 化学法测定DNA的核苷酸序列 黄秉仁蔡良琬阎珺139

第一节 化学法测定DNA核苷酸序列的基本程序139

第二节 设备、材料及使用140

第三节 DNA片段的制备141

第四节 DNA片段的末端标记143

第五节 单末端标记DNA片段的分离和提纯147

第六节 特异性的碱基化学裂解反应150

第七节 测序胶的制备及电泳155

第八节 放射自显影X光片的固定157

第九节 化学法测序的改进和展望158

第十节 小结158

参考文献159

第二章 末端终止法测定DNA的核苷酸序列 琦祖和160

第一节 概述160

第二节 M13mp载体在末端终止法中的应用162

第三节 被测DNA的分子克隆169

第四节 制备引物175

第五节 末端终止法序列测定177

第六节 测序用聚丙烯酰胺凝胶电泳184

第七节 序列的解读及常见问题187

参考文献190

第三章 RNA的核苷酸序列测定 程振起肖啸191

第一节 器皿和溶液的准备192

第二节 小分子RNA的提取与纯化193

第三节 RNA的末端标记及大分子RNA的特异性降解195

第四节 序列分析酶解直读法202

第五节 化学裂解直读法209

第六节 序列分析双向直读法216

参考文献221

第六部分 核酸的分子杂交222

引言222

第一章 标记探针的方法 袁建刚223

第一节 缺口翻译标记DNA探针223

第二节 ？I标记RNA和DNA226

第二章 液相杂交 袁建刚230

第一节 用于斑点杂交的直接点样法234

第三章 固相杂交 袁建刚234

第二节 DNA的吸印转移237

第三节 RNA的吸印转移239

第四节 DNA和RNA的电泳转移240

第五节 硝酸纤维素膜固相杂交242

参考文献245

第七部分 核酸的电镜观察与应用246

引言246

第一章 核酸电镜标本的制作原理及其方法 蔡良琬梁杰宋国兴248

第一节 基本原理248

第二节 支持膜的制作方法及特点248

第三节 样品制作方法250

第一节 对制备核酸电镜标本的质量要求254

第二节 病毒DNA与RNA的电镜标本的制备254

第二章 核酸电镜标本的几种制备方法 蔡良琬梁杰宋国兴254

第三节 DNA-蛋白质复合物的电镜标本的制备255

第四节 核酸变性标本的制备256

第五节 DNA的暗视野观察258

参考文献258

附录259

一、常用的数据259

二、DNA和RNA含量的测定259

三、玻璃器皿和塑料器皿的处理260

四、有机试剂及其处理261

五、透析袋的处理261

六、常用的同位素及标记化合物262

七、几种常用的酶267

八、限制性内切酶269

名词缩写274

索引275