《杂交瘤技术》求取 ⇩

一、导言1

二、培养液和细胞悬液的制备3

A.100×浓缩的次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷原液3

B.培养液和盐溶液的配制3

C.聚乙二醇(PEG)的配制4

D.细胞悬液的制备4

1)小鼠脾细胞4

2)小鼠腹腔巨噬细胞4

三、细胞融合4

A.动物的选择4

B.免疫5

C.供融合的细胞系5

D.应用PEG进行细胞融合6

A.软琼脂克隆技术及具有抗SRBC活性杂交瘤克隆的检测7

四、克隆7

B.应用有限稀释法进行克隆8

五、抗体特异性和抗体亚类的测定9

A.Jerne氏单细胞空斑试验9

1)HRBC的TNP偶联10

2)蛋白A结合的SRBC10

B.点试验(Spot test)11

C.凝集试验11

D.琼脂扩散试验11

E.酶免疫测定(EIA)和放射免疫测定(RIA)12

1)材料12

a)家兔抗小鼠Ig12

b)应用亲和层析法分离家兔抗小鼠Ig12

c)应用125I标记家兔抗小鼠免疫球蛋白12

d)EIA用的试剂13

2)方法14

3)细胞的EIA和RIA15

a)不贴壁细胞15

b)用于抗体结合试验的细胞固定技术16

c)固定细胞的EIA法17

F.EIA在亚类测定上的应用17

G.不同单克隆抗体对同一抗原的结合18

H.51Cr释放试验20

六.应用蛋白A-Sepharose亲和层析法分离小鼠IgG及其亚类21

七.用14C-亮氨酸进行免疫球蛋白的标记22

八.细胞表面抗原的标记和免疫沉淀22

九.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳24

A.试剂、化学物质和材料24

B.操作方法26

C.蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝化纤维素膜上27

十、等电聚焦29

A.材料29

B.凝胶槽的装配29

C.5%聚丙烯酰胺凝胶的制备29

D.样品的还原与加样30

E.聚焦方法30

F.pH梯度的测定30

G.蛋白区带图谱的染色30

十一、免疫萤光31

十二、从腹水中大量提纯单克隆抗体31

十三、支原体的检查与控制措施33

十四、杂交瘤细胞的冻存35

附图36