《表1 Stern-Volmer方程分段线性拟合得到的荧光淬灭速率及淬灭常数》

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《两种多吡啶钌异构体用于抑制Aβ_(42)纤维化和降低Aβ_(42)细胞毒性的研究》

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含有芳香环的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸具有自身荧光性质，因此含有酪氨酸残基的Aβ42多肽具有自发荧光性质，在270 nm光激发下，在290～380 nm范围内有荧光出现。当Aβ42与其它分子发生相互作用时会使自身荧光降低，荧光强度降低越明显，说明相互作用越强。向Aβ42体系中逐渐滴加钌配合物，研究了钌配合物与Aβ42的相互作用。设定激发波长为274 nm，向含20μmol/L的Aβ42体系中逐步滴加钌配合物，随着钌配合物浓度的增大，体系的荧光强度逐渐下降（见图7）。采用Stern-Volmer动态荧光淬灭方程[15，16]:F0/F=1+Kqτ0[Q]=1+KSV[Q]（F0和F分别表示有无淬灭剂时体系的荧光强度，Kq为荧光淬灭速率，τ0为荧光分子的荧光寿命，大多数生物分子的荧光寿命可认为是10-8s；KSV为荧光淬灭常数；[Q]为体系中淬灭剂的浓度）。对配合物与Aβ42间的淬灭方式进行表征，从（F0/F-1）-[Q]图中各数据点可以看出，Stern-Volmer曲线分成两段线性区间，说明钌配合物与Aβ42之间同时存在着动态荧光淬灭和静态荧光淬灭两种淬灭方式。且随着配合物浓度增加，Stern-Volmer曲线向y轴靠近，说明随着配合物浓度的增加，配合物对Aβ42的荧光淬灭愈加趋向于动态淬灭。以体系中钌配合物与Aβ42的浓度比（[Ru]/[Aβ42]）为0.3611作为分界点，对Stern-Volmer曲线进行分段线性拟合并求出各自相对应的Kq、KSV和R2（相关系数的平方）（见图7、表1）。由于两种钌配合物使Aβ42内部荧光淬灭的淬灭速率均大于2×1010，因此，p23OH和p25OH两种配合物使Aβ42荧光淬灭的方式主要为静态荧光淬灭。但是随着钌配合物浓度的增加，动态淬灭的效果逐渐增强。钌配合物对Aβ42的静态淬灭可利用公式log（F0/F-1）=logK+nlog[Qt]（K:表观结合常数；n:结合位点数）来计算淬灭剂与荧光分子间的表观结合常数及结合位点数（见图8），两种钌配合物与Aβ42的log（F0/F-1）-log[Qt]曲线具有很好的线性相关，具体的线性方程及所求得的表观结合常数和结合位点数n见表2。从表中可见，两种钌配合物和Aβ42的表观结合位点数和结合常数都比较接近，且表观结合常数都小于0.08 mol/L。说明两种钌配合物与Aβ42的相互作用较弱，主要以非共价作用形成复合物，如静电作用、疏水作用和氢键作用等。