《表1 细辛甲基丁香酚合成相关酶基因扩增引物信息》

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《细辛甲基丁香酚合成相关酶基因的克隆与序列分析》

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根据课题组前期获得的细辛根、根茎和叶转录组数据，筛选到甲基丁香酚合成相关酶基因的Unigene，以Primer 5.0设计特异性引物（表1）。PCR反应体系按照全式金TopTaq酶说明书操作，PCR反应程序为94℃变性30 s，相应退火温度30 s，72℃延伸（1～2 kp/min），共35个循环，电泳回收后将回收产物连接到Peasy-T3载体上，转入DH5α感受态细胞，在含有氨苄青霉素（100μg/mL）的LB平板上挑取阳性克隆，进一步经菌液PCR和电泳检测验证后，送交哈尔滨博仕生物公司测序。