《表4 转化不同靶序列编辑效率统计结果》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《基于优化sgRNA系统提高海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑功效的研究》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

表格中分子代表突变个数，分母代表克隆测序个数；概率值均为平均值。

将转化Gb U6-5P-GGB-sgRNA1和转化Gb U6-5P::GGB-sgRNA1-Gb U6-4P::ERA1-sgRNA2提取的基因组DNA采用酶切（Kpn I、Sac I）后PCR方式检测，转化Gb U6-5P::GGB-sgRNA1-Gb U6-4P::GGB-sgRNA2采用直接PCR方式检测，结果如图5，转化Cas9 I型靶序列编辑载体的原生质体DNA酶切后PCR检测存在扩增条带，对照则未出现明显条带，初步证明，转化Gb U6-5P-GGB-sgRNA1和转化Gb U6-5P::GGB-sgRNA1-Gb U6-4P::ERA1-sgRNA2编辑载体造成海岛棉基因组相应的靶位点突变，将上述PCR产物克隆后测序结果（图6和图7）分析发现，所有转化靶序列的原生质体均检测到碱基突变现象，转化与之对应空载体的原生质体未检测到碱基突变现象，对比转化不同载体的原生质体，虽然靶序列作用位点相同，但引发碱基突变的个数和位置均不同。分析后认为，可能是转化不同编辑载体引起不同程度编辑效应造成的结果。针对转化Shift相关靶序列的基因组编辑载体，也获得与上述相同的实验结果，相比同一位点2种（No shift sgRNA和shift sgRNA）不同靶序列类型，转化No Shift靶序列的原生质体其编辑效率高于转化Shift靶序列，增幅为20.0%～49.6%（表4）。转化Cas9II型编辑载体结果与上述类似。