《表1 白念珠菌基因编辑常用的基因转化盒和筛选标记》

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《白念珠菌基因功能研究的策略》

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转座子诱变常用于细菌和酵母基因组学的功能筛选。Uhl et al.(2003）利用酵母Tn7转座子和URA3筛选标记，构建了含有白念珠菌基因组不同酶切片段的质粒，将质粒线性化后导入白念珠菌，获得了杂合缺失菌18 000多株，通过拯救质粒法和测序等方法鉴定出146个基因影响白念珠菌形态转换。Blankenship et al.(2010）利用同样的方法，通过考察细胞壁相关药物敏感性的变化，确定了8个与酿酒酵母功能不同的激酶在白念珠菌细胞壁应激中的作用。Diezmann et al.(2012）通过Mitchell课题组赠予的菌库筛选了不同生长条件下与热休克蛋白Hsp90p相互作用的基因网络。此外，Oh et al.(2010）还利用Tn5转座子构建了含有3 633个转座子插入的突变体文库，考察了4种不同营养条件下，269个具有单倍体不足效应的基因。此外，他们还用单倍体缺失菌库筛选获得了布雷菲德菌素A的靶标Sec7p，以及化合物0136-0228的特异性靶标Tfp1p，这些结果突显了单倍体不足机制在白念珠菌药物靶点确定中的应用价值。文中提及的基因改造方法和构建的菌库见表1和表2。