《表1 冈田绕眼果蝇Aoattacin对于细菌的最小抑菌浓度(MIC)》

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《基于转录组测序的冈田绕眼果蝇aoattacin基因筛选及在昆虫细胞中表达、抑菌活性检测》

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本课题组前期利用化学合成方法获得的抗菌肽Aoattacin蛋白对表1中的待选细菌，如:枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、稳定伯克霍尔德菌（Burkholderia stabilis）、鸡伤寒沙门氏菌（Salmonella gullinarum）、栖冷克吕沃尔菌（Kluyvera cryocrescens）等的最低抑菌浓度均大于100μmol/L（未发表数据），可以认为对这些细菌没有起到抑制作用。而本研究中通过昆虫细胞表达Aoattacin对上述细菌都具有很强的抑制效果，这表明与合成抗菌肽相比，真核细胞表达的Aoattacin抑菌谱更广。此外，通过真核表达系统表达家蝇Aoattacin的研究目前报道也较少，较为成功的有中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中稳定表达家蝇抗菌肽Attacin的报道[25]，而本实验成功将包含冈田绕眼果蝇抗菌肽aoattacin基因的杆状病毒表达载体转染到Sf9细胞，通过Western Blot对目的蛋白表达情况检测时发现目的条带的位置与预测分子量（34 kD）有所偏差，我们推测由于真核表达蛋白存在一定后期修饰造成的分子量变化，后续我们也正在利用质谱法对该蛋白进行鉴定以证实其修饰方式。表达的Aoattacin蛋白的分子量与预测的大小基本一致，表明Bacmid重组质粒在昆虫Sf9细胞中成功表达。虽然经过前期密码子及MOI的优化，但结果仍然显示aoattacin基因在Sf9细胞中表达量较小，距离后期进行规模化生产仍有一定难度，但本实验也为后续规模化生产提供了基础实验数据的参考。