《表3.F0、F1代小鼠TA克隆测序结果》

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《应用CRISPR/Cas9技术制备Ace2基因敲除小鼠模型及基因型的鉴定》

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选取经PCR鉴定获得的WT小鼠和Ace2-/Y小鼠，进一步使用qRT-PCR和Western blot方法检测Ace2 mRNA和蛋白在小鼠肺和肾脏组织中的表达情况。如图7所示，Ace2-/Y小鼠肺和肾脏组织中qPCR无信号（红色曲线），而WT小鼠肺和肾脏组织中Ace2 mRNA表达Ct值约20（绿色曲线），结果表明Ace2-/Y小鼠肾脏、肺中未检测到Ace2 mRNA表达。以GAPDH为内参，通过Western blot检测ACE2蛋白表达情况。结果显示，在WT小鼠肺和肾脏组织中可见分子量为92 kDa的ACE2蛋白表达，而在Ace2-/Y小鼠肾脏、肺中未检测到ACE2蛋白表达（图8），表明Ace2-/Y小鼠构建成功，可用于后续动物实验。