《表1 乙酰乳酸合成酶PCR扩增相关引物》

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《大葱ALS基因的克隆及其CRISPR/Cas9载体的构建》

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注:边框内部分:酶切位点；划线部分:根据ALS基因设计的引物

根据实验室前期转录组数据获得ALS基因的部分序列，用primer5软件设计引物（表1）扩增ALS基因的编码区序列。引物由北京奥科鼎盛生物科技公司进行合成。PCR反应体系为：大葱c DNA1μL，10μmol/L的上下游引物各1μL，2×Easy Taq誖PCR SuperMix10μL加水补足至20μL。PCR扩增程序如下：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃继续延伸7 min，4℃保存。PCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，纯化回收后连接到载体p EASY-T5中，转化筛选后将阳性克隆送奥科鼎盛生物科技公司测序，测序得到的ALS基因编码区序列提交至NCBI（GenBank登录号:MG922111）。