《表1 Real-time PCR反应步骤与条件》

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《活血化瘀治法药组对大鼠乳腺癌糖酵解的影响》

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运用NCBI数据库的引物设计和特异性检验工具Primer-BLAST对大鼠Snail、LDHA、PDK1、β-actin基因引物进行设计，并由上海生工合成。Snail上游（20bp）:CTG GGC GCT CTG AAG ATG CA，下游（22bp）:GGA GCA GCC AGA CTC TTG GTG T；LDHA上游（20bp）:CTG TCT CTG AGA CAC ACT GC，下游（20bp）:CAC ACT GGA GCC AGG TTA TA；PDK1上游（21bp）:ACC ATG CAG ACA AAG GCG TTT，下游（23bp）:TAT ACA CAG GGA GTC TTT CGA TG；β-actin上游（20bp）:CCC ATC TAT GAG GGT TAC GC，下游（21bp）:TTT AAT GTC ACG CAC GAT TTC。按照FastStart Essential DNA Green Master试剂盒操作，即以DMBA模型对照组中1个样品作为对照，β-actin为内参。20μL的反应体系（Master Mix，2×conc10μL、上、下游引物各1μL、cDNA 2μL、Water，PCR grade 6μL），每个反应重复3次，反应条件见表1。