《表1 real-time PCR反应引物序列》

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《自身免疫性肝炎患儿外周血单个核细胞miRNA-181c表达与干扰素γ、趋化因子配体10、Toll样受体4的相关性分析》

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采集受试儿童清晨空腹静脉血，采用Ficoll分层液分离得到PB-MC，使用Trizol法提取PBMC中总RNA，并进行RNA纯度及完整性测定。以提取的RNA作为模板，制备c DNA。然后以c DNA为模板进行PCR检测，循环参数设定为:95℃预变性3 min，95℃15 s、60℃40 s，共45个循环，做溶解曲线及扩增曲线验证扩增产物特异性，设定极限值和阈值，读取阈循环（Ct）值，以U6作为内参基因，采用2-△△Ct法计算miRNA-181c及TLR4 mRNA相对表达量。real-time PCR反应引物序列（表1）设计参照文献[7]，引物由上海生工生物工程公司合成。