《表1 PCR引物与反应条件》

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《实时荧光定量PCR法对温度变化下不同工艺硝化细菌丰度的影响》

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实时荧光定量PCR质粒制备如下。采用FastDNA○RSpin kit for soil DNA试剂盒提取污水样品中含有硝化细菌的DNA，包括样品裂解、吸附DNA、洗涤杂质、洗脱DNA过程。之后，通过PCR方法获得目的基因，PCR反应采用试剂盒，反应体系（20μL）：上游引物0.4μL；下游引物0.4μL；GoTaq Green Master Mix 10μL；模板2μL；ddH2O补至20μL，引物及扩增条件如表1所示。将扩增后的PCR产物（DNA片段）通过新鲜的TAE缓冲液进行琼脂糖凝胶电泳，做3个平行样，同时通过DL2000marker进行比较，确定扩增片段大小是否正确；将PCR产物从琼脂糖凝胶电泳中分离纯化，并且通过测序验证；将该PCR产物与pGEMZ载体结合，形成质粒；将质粒转化至大肠杆菌DH5α、涂板、筛选、扩大培养，质粒提取及纯化。