《表5 待测药物的细胞毒作用TC50》

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《金银花和黄芩不同煎煮方式化学成分变化及抗病毒作用比较》

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注:C为药物初始浓度。

从培养箱中取出生长成孔内单层细胞的96孔板，弃去96孔板中的培养液，用PBS冲洗1～2次，将供试品药物从最大无毒浓度起，用2%维持液按2倍比稀释10个浓度梯度，每孔100μL依次接种于96孔板中，每浓度重复4个孔，每孔再加入稀释了1 000倍TCID50的病毒液100μL，以此作为药物组。同时设空白对照组（无细胞，药液、病毒液各100μL）、细胞对照组（2%维持液200μL）、病毒对照组（维持液、病毒液各100μL）、阳性对照组（利巴韦林、病毒液各100μL），置37℃、5%CO2培养箱中培养。在倒置显微镜下观察96孔板内细胞病变情况，当细胞出现90%以上的病变时终止培养，弃去药液，用PBS冲洗1～2次，每孔加100μL CCK-8染色剂染色，置37℃、5%CO2病毒培养箱中培养40min，用酶标仪设450nm波长处测定吸光度OD值。应用Reed-Muench公式，计算出药物的半数有效浓度（EC50）、治疗指数（TI）。见表5-表6。