《表1 四种四环素耐药基因的PCR引物的相关信息[21-22]》

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《对污水处理厂中大肠杆菌的四环素耐药性分析》

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利用PCR扩增法检测大肠杆菌中四环素耐药基因的分布，选择扩增的四环素耐药基因为tet（A）、tet（B）、tet（L）和tet（M）．其中，tet（A）和tet（B）是典型且检出率较高的外排泵基因，外排泵是将细胞内的毒性底物（包括大多数临床使用的抗生素）从细胞内排出到外部环境中的转运蛋白[19].tet（L）是主要存在于小的传递质粒中的典型基因，tet（M）是典型的核糖体保护蛋白的编码基因[20]．本研究选择这4个耐药基因进行扩增，其引物信息如表1[21-22]．本次实验PCR扩增的体系为30μL，包括15μL 2倍Premix、2μL F-Primer（10μmol/L）、2μL R-Primer（10μmol/L）、2μL DNA、9μL水．PCR热循环过程为:首先于94℃预变性5 min；然后进行35个扩增循环，在每个循环中，94℃保持1 min，55℃或56℃退火1 min和72℃延伸1.5min；最后72℃延伸10 min.PCR扩增产物利用琼脂糖凝胶电泳法来初步判断是否存在该耐药基因目标片段．