《表1 突变引物序列：SPINK1基因多态性对乌司他丁治疗急性胰腺炎疗效的影响》

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《SPINK1基因多态性对乌司他丁治疗急性胰腺炎疗效的影响》

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患者入院后抽取静脉血5 m L置于抗凝管中，10 000 r/min离心3 min，弃上清；双蒸水200μL重悬，样品中加入150μL Na Cl，室温8 000 r/min离心20 min，去沉淀，然后在上清液中加入等体积预冷异丙醇，混匀，20℃处理30 min，14 000 r/min离心10 min，去上清液，加70%乙醇500μL，13 000 r/min离心12 min；弃乙醇，沉淀干燥后，加TE缓冲液30μL溶解DNA。应用Primer Express软件设计突变引物序列（表1）。PCR反应体系:模板DNA 50 ng，15μmol/L上、下游引物1μL，0.2 mmol/L d NTP 5μL，10×PCR缓冲液5μL，1 U Taq酶1μL（Promega公司），补充dd H2O至体积为50μL。反应条件:94℃5 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，35个循环；72℃7 min。上美国ABI公司9700型PCR仪。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后，切下DNA条带，使用胶回收试剂盒（Qiagen公司）进行溶胶、过柱、洗涤、洗脱，交由生工生物工程（上海）股份有限公司进行基因测序。