《表2 牙鲆小清蛋白的质谱鉴定结果》

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《牙鲆(Paralichthys olivaceus)中不同亚型小清蛋白的提纯与鉴定》

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将图1中3个不同亚型小清蛋白电泳胶切下，分别进行蛋白提取，胰蛋白酶酶解后进行Nano-LC-MS测定，数据由Proteome Discoverer 1.3分析，与NCBI蛋白库进行匹配，根据蛋白的匹配率确定目标蛋白的种类。由图4所示，通过SDFIEEDELK和SHFIEEDELK片段确证提纯的蛋白含有牙鲆小清蛋白XP＿019938975.1和XP＿019958408.1。由表2可见，PVI、PVII和PVIII均匹配为牙鲆小清蛋白，其中PVI和PVII被鉴定与XP＿019958408.1匹配度高，分子质量为12 151 Da，pI值为5.14，但PVII蛋白得分略高于PVI；PVIII被鉴定与XP＿019938975.1匹配度高，分子质量为11 645 Da，pI值为4.69。但通过2.1节电泳结果分析，PVI的分子质量应在1 4 k D a左右，与X P＿0 1 9 9 5 8 4 0 8.1蛋白分子质量不相符，最终确定PVII为XP＿019958408.1，PVIII为XP＿019938975.1。为研究PVI和PVII的序列差异，分析了氨基酸序列的修饰情况，由表3可知，PVI肽段的修饰数量明显多于PVII，修饰类型有磷酸化修饰（Phospho）和泛素化修饰（GlyGly），推测PVI分子质量的增加，可能是由PVII被修饰后增加了磷酸和甘氨酸基团引起的，PVI可能是PVII修饰后蛋白。