《表1 β-Tr CP1、HAUSP、UHRF1、β-actin的引物序列》

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《β-TrCP1和HAUSP影响胶质母细胞瘤细胞增殖和侵袭并调控UHRF1蛋白水平》

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NC组、β-TrCP1组、si-NC组和si-HAUSP-1组、si-HAUSP-2组及si-HAUSP-3组U87细胞分别转染24 h后，采用TRIzol裂解液分别提取各组细胞总RNA，Thermo超微量紫外分光光度计测定RNA浓度和质量。取2μg RNA逆转录合成cDNA，具体步骤参照逆转录试剂盒。实时荧光定量PCR (RT-qPCR）反应在Thermo RT-qPCR仪上进行。引物由北京吉玛公司合成。β-TrCP1、HAUSP、UHRF1、β-actin的引物序列见表1。β-actin为内参，每个反应设3个复孔，各个基因的反应程序均为：94℃3 min，94℃30 s，58℃30 s，72℃30 s，40个循环。实验重复3次，以2-△△Ct计算各基因mRNA相对表达水平。因si-HAUSP-2组中HAUSP mRNA下降最为显著，后续实验均采用si-HAUSP-2 (si-HAUSP组）。