《表2 PEG沉淀试验的Box-Behnken设计方案及响应值结果》

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首先以样品3为考察对象,对PEG沉淀过程中添加的PEG分子量、PEG浓度及氯化钠浓度的影响设计了Box-Behnken响应面试验,结果见表2。经过PEG沉淀后,对146S特征吸收峰有干扰的物质都被不同程度地去除,并能检测到146S特征峰。PEG沉淀的条件不仅影响到干扰杂质的去除效果,同样也会影响146S抗原经过沉淀复溶后的收率。根据Design-Expert 8.0拟合结果,向水相抗原中加入质量体积比为10%的PEG 6 000,NaCl浓度为0 mol/L时进行沉淀复溶的结果最佳,HPSEC检测具有最高值。在该条件下对样品1和3的水相抗原进行处理后进行HPSEC检测的结果见图3。该最佳条件下测得样品1浓度为9.7μg/mL,样品3浓度为10.4μg/mL。作为对比,将7.5μg/mL的146S纯品按照相同操作进行PEG沉淀及复溶,测得浓度为7.1μg/mL,与原浓度相近,但经过处理后结果略低。