《表1 引物信息:苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11蛋白定点突变对甜菜夜蛾和棉铃虫杀虫活性的影响》

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《苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11蛋白定点突变对甜菜夜蛾和棉铃虫杀虫活性的影响》


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下划线:重叠序列;小写字母:突变位点

以转化E.coli JM109菌株的pET-vip3Aa11质粒为模板,分别以G200S-F/R、F442S-F/R和S726T-F/R为引物(表1),PCR扩增含突变位点的vip3Aa11基因全长片段。PCR反应体系均为:质粒1μL,正反向突变引物(10μmol/L)各1μL,2×TransStart Fast Pfu PCR SuperMix 25μL,加ddH2O至50μL。PCR反应条件均为:94℃预变性2 min;94℃变性20 s,55℃退火20 s,72℃延伸3 min,23个循环;72℃延伸10 min。