《表2 Plackett-Burman实验设计及响应值》

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《六妹羊肚菌工厂化制备液体菌种繁育条件的优化》

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（1） 液体菌种培养条件单因素优化:pH:用250mL锥形瓶装液量100mL，用稀释的H2SO4或NaOH调节培养基的pH分别为3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5，每个梯度3个重复，置于25℃摇床180r/min振荡培养5d。收集羊肚菌菌丝体，经双层纱布过滤、去离子水洗涤、50℃烘箱干燥至恒重后称量菌丝体干重。温度:采用筛选出的培养基，采用250mL锥形瓶装液量100mL，分别置于15、18、21、24、27、30、33℃的摇床中180r/min振荡培养，每个梯度3个重复。转速:采用筛选出的培养基，采用250mL锥形瓶装液量100mL，分别置于140、160、180、200、220r/min的摇床中震荡培养，每个梯度3个重复。（2）Plackett-Burman实验筛选影响液体菌种发酵显著因素:通过Design Expert 8.0.6软件中Placket-Burman选项筛选对羊肚菌液体菌种影响最显著的3个因素，N=11，具体参数设计如表1、表2（Srinivas et al.1994）。（3）响应面设计优化羊肚菌液体菌种配方:通过PB实验筛选出对菌丝体生物量影响最显著的3个因素后，首先通过最陡爬坡实验，设计合理的步长与变化方向，确定当3个因素交互影响时菌丝体生物量的峰值，然后根据达到峰值时的3个因素水平设计Box-Behnken方案，最终得到羊肚菌液体菌种最优发酵配方（Francis et al.2003；Li et al.2014）。