《表5 候选内参基因稳定性分析》

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通过geNorm、Normfider和Bestkeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行分析。geNorm软件是根据计算所得的平均表达稳定（average expression stability，M）值来表示候选基因的表达稳定性，M值越小候选基因稳定性越好[8]。geNorm分析结果表明7个候选内参基因的M值均较低（<0.4），其中ACT的M值最低，为0.249，稳定性最好，也最适合作为内参基因；18S的M值最大，为0.370。NomFinder是根据候选基因的表达稳定值（stability value，SV）来表示候选基因的表达稳定性，SV值越小，候选基因越稳定[8]。NormFinder分析结果表明ACT的SV值最小，稳定性最好；18S的SV值最大，geNorm与Normfider分析结果完全一致。BestKeeper软件是通过导入Ct值来计算获得候选内参基因在所有样品中的SD值。BestKeeper分析结果表明18S的SD值最小为0.130，稳定性最好；GAPDH SD值最大为0.252，稳定性最低。BestKeeper分析结果与geNorm和Normfider的分析结果差异较大。利用Excel对geNorm、Normfider和Bestkeeper 3个软件分析出的7个候选内参基因的稳定性排名几何平均数进行综合性评价，结果表明，ACT稳定性最好，最适合做为本研究的内参基因，β-TUB稳定性最低（表5）。根据3种软件排名稳定性的r值分析其相关性，结果发现geNorm与NormFinder的相关性最高（r=0.97），达到极显著水平，而NormFinder与Bestkeeper、geNorm与BestKeeper则均为负相关。