《表2 荧光定量PCR标准曲线》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《团头鲂黑素皮质素3型受体基因克隆及表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

取组织各0.05～0.1 g，加入1 mL RNAiso Plus（TaKaRa，Japan），立即用高通量组织破碎仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）匀浆。RNA的提取按照试剂的操作说明进行，应用NanoDrop2000（Thermo Scientific）检测RNA质量及浓度，选取OD260/D280值在1.8～2.0的样品。最终以40 ng/μL终浓度RNA作为模板，按照Ons Step PrimeScriptTM RT-PCR Kit（TaKaRa，Japan）试剂盒说明，配置反应体系，反应总体积20μL，包含:2×One Step SYBR RT-PCR Buffer 4，10μL；TaKaRa Ex Taq HS Mix，1.2μL；PrimeScript PLUS RTase Mix，0.4μL；Forward Primer（10μmol/L），0.8μL；Reverse Primer（10μmol/L），0.8μL；ROX Reference Dye II，0.4μL；Total RNA，2μL；RNase Free dH2O，4.4μL；设置反应参数（阶段1:42℃5 min，95℃10 s，1个循环；阶段2:95℃5 s，60℃34 s，40个循环；阶段3:95℃15 s，60℃1 min，95℃30 s，1个循环），进行荧光定量PCR反应。每个待测样本进行目的基因mc3r和内参基因rpII扩增，设置3个计数重复，每次反应设置阴性对照。采用标准曲线法计算目的基因mRNA的相对表达量，本研究所使用标准曲线方程见表2。团头鲂mc3r mRNA RT-PCR所用引物列于表2。rpII引物序列参照Xue等[20]。所有引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司进行合成。