《表3 PPRV、RVFV、SBV三重实时荧光定量RT-PCR标准品重复性试验》

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《PPRV、RVFV、SBV三重普通及实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用研究》

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不同稀释度的质粒标准品出现梯度扩增曲线，见图5～图7。由图5～图7可知，若以Ct值35为阳性样品临界值来计算，则PPRV-M-Cy5探针的样本理论上的检测敏感性可低至101.33copies/μL，SBV-NP-VIC探针对样本的理论检测敏感度可达102.13copies/μL，RVFV-NP-FAM探针对样本的理论检测敏感度可达102.02copies/μL；较普通常规RT-PCR的敏感性均高近10倍。以优化的反应条件选取104、105、106、107copies/μL的质粒标准模板分别连续扩增3次进行荧光信号的检测，检测结果显示PPRV、RVFV、SBV每个梯度的样本重复性均很好。统计学分析结果见表3。由表3可知，组内重复性试验中变异系数均小于2.5%，表明所构建的方法具有较好的重复性与稳定性。