《表1 CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2及β-actin引物信息》

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《含反药组合的海藻玉壶汤中不同品种海藻与甘草配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏的影响》

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7.荧光定量法检测CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2m RNA表达 取肝组织约100mg，用Trizol提取组织总RNA，采用紫外分光光度法检测总RNA的浓度和纯度。按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录合成c DNA。按试剂盒说明，在超净台中，取3μg总RNA样品为模板，Oligo（DT）1μL作为引物，使用1μL反转录酶，RNA酶抑制剂1μL，脱氧核糖核苷三磷酸2μL，5×逆转录酶缓冲液4μL，配制反应体系为20μL。在逆转录产物中加入130μL双蒸水，得到最终的c DNA。Real-time q PCR反应体系:SYBR Green mixture 10μL，上、下游引物各0.5μL（10μmol/L），c DNA 5μL，双蒸水4μL，总反应体系20μL。反应条件如下:95℃10min，95℃10s、55℃或60℃（CYP 2E155℃，CYP 3A1和CYP 3A2 60℃）30s，40个循环。采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析。引物序列具体见表1。