《表2 LM的QRDR相关基因引物Tab.2 Primers of QRDR genes in Listeria monocytogenes》

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《食品源单增李斯特菌喹诺酮类抗生素耐药机制研究》

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按照细菌基因组提取试剂盒的操作步骤提取LM的基因组作为扩增模版，其中QRDR相关基因gyr A、gyr B，par C、par E、fepR的扩增引物和反应条件如表2。PCR体系为50μL，包含5×Prime STAR buffer（Mg2+Plus）10μL，d NTP mixture（4 mmol/L）4μL，正向引物与反向引物各0.3μmol/L，2μL基因组以及1.25 UTaq DNA聚合酶。扩增条件为:94℃预变性5 min，94℃变性30 s，退火1 min，72℃延伸1 min，35个循环后，72℃延伸10 min。扩增产物经测序后，使用DNAMAN软件对其序列进行拼接。以单增李斯特菌标准菌株EGDe基因组序列作为参考序列，利用Mega 7.0软件对QRDR基因的测序序列进行BLAST比对分析，以确定其QRDR基因突变情况。