《表1 引物序列：神经生长因子β对椎管内神经鞘瘤细胞增殖的影响》

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《神经生长因子β对椎管内神经鞘瘤细胞增殖的影响》

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椎管内神经鞘瘤细胞按常规方法消化。以每孔5×104细胞接种于六孔板中的6孔，对照组给予3 mL体积分数10%FBS·DMEM培养基，实验组分别给予质量浓度为15，30，60，120，240μg/L神经生长因子β培养液3 mL，继续培养24 h。TRIzol法提取总RNA，反转录成c DNA，实时荧光定量PCR法检测TrkA、AKT蛋白质对应的mRNA表达情况，样本重复3孔，引物序列见表1。PCR反应体系总体积为20μL，设定反应程序:50℃2 min；95℃10 min；95℃15 s、60℃1 min，共40次循环，以2-??Ct法计算各组间mRNA的表达量。参照上述方法，每孔5×104细胞接种于六孔板中的4孔，对照组给予3 mL体积分数10%FBS·DMEM培养基，实验组分别给予3 mL神经生长因子β（120μg/L）、3 mL神经生长因子β（120μg/L）+K252a（400 nmol/L）、3 mL神经生长因子β（120μg/L）+LY294002（50μmol/L），采用2-??Ct法计算TrkA、AKT蛋白质对应的mRNA的相对表达水平。