《表1 引物信息表：肝细胞生长因子和机械生长因子对肛提肌成肌细胞增殖最佳作用浓度的研究》

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《肝细胞生长因子和机械生长因子对肛提肌成肌细胞增殖最佳作用浓度的研究》

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（1）将肛提肌成肌细胞分为4组:正常对照组、SUI组（0 ng/m L）、HGF组、MGF组（HGF组、MGF组均在最佳作用浓度下），用反转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）法检测肛提肌细胞Laminin、Dystrophin mRNA的转录水平。（2）建立20μL逆转录体系[dNTP Mix（4μL）+Primer Mix（2μL）+RNA Template（7μL）+5x RT Buffer（4μL）+DTT（2μL）+Hi Fi Script（1μL）]，将RNA通过逆转录Hi Fi Script cDNA第一链合成试剂盒合成cDNA。（3）设计、合成引物，见表1。（4）建立25μL逆转录体系[RNase Free d H20（9.5μL）+c DNA/DNA（1μL）+上游引物（1μL）+下游引物（1μL）+2xULtraSYBR Mixture（12.5μL）]。（5）满足PCR反应条件:预变性（95℃/10 min）、变性（95℃/1 s）、退火（57℃/30 s）、延伸（72℃/30 s），循环40次。（6）以GAPDH为内参，用2-△△Ct比较法算出各组肛提肌成肌细胞中Laminin、Dystrophin mRNA的相对表达量（在P<0.05的情况下，如果2-△△Ct<1，说明目的基因在试验组中表达下调；2-△△Ct>1说明表达上调；否则表达无差异）。