《表1 黄瓜SOD基因的引物》

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《黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化》

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反转录操作步骤根据TAKARA公司反转录试剂盒（code No.6210A）说明书进行。黄瓜SOD基因的PCR扩增采用表1中的SOD1-F/SOD1-R引物。反应体系共计50!L，ddH2O 38!L，10#PCR buffer 5!L，2.5 mmol/L dNTP 2.5!L，上下游引物（10!mol/L）各1!L，c DNA模板2!L，Taq酶（5 U/!L）0.5!L。扩增反应（Touch-down PCR）程序:94℃预变性3 min，然后94℃1 min，53℃45 s，72℃45 s，3个循环；94℃1 min，51℃45 s，72℃45 s，共30个循环。扩增反应结束后，取5!L PCR产物在琼脂糖凝胶（1%）上电泳。PCR产物通过DNA凝胶回收试剂盒割胶回收后，与p TA2载体连接，转化E.coli TG1感受态细胞，在含氨苄（Amp）的LB平板上筛选，随机挑取4～6个单菌落培养过液并进行测序（由上海铂尚生物技术公司完成）。通过NCBI网站上的Blast软件进行序列比对与分析。