《表1 给药处理方案：靶向EGFR二聚化界面单链抗体的构建及表达》

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《靶向EGFR二聚化界面单链抗体的构建及表达》

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注:1为阴性对照；2和4为阳性对照。

A431和NIH-3T3细胞用DMEM培养基（含10%FBS）中，37℃、5%CO2培养至丰度为80%。胰酶消化细胞，离心，重悬，计数。按照3×105个/孔种于6孔板，37℃、5%CO2培养至丰度为80%。吸弃上清，冰预冷的PBS（pH 7.0）洗3次，给药冰浴2 h（见表1）。冰预冷的PBS（pH 7.0）洗3次，按照每孔加入150 m L NP-40裂解液（含蛋白酶磷酸化酶混合物）裂解30 min，用细胞刮刮下放入EP管中，涡旋震荡30 s，离心。上清用BCA蛋白定量试剂盒，加入1/4样品体积的还原性5×SDS-loading buffer，沸水浴5 min。而后进行Western Blotting分析，用抗EGFR（Y1068）和抗β-actin抗体作为一抗，羊抗鼠HRP-IgG（VH-VL）为二抗。